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番茄斑萎病毒属(Tospo virus)侵染植物,寄主范围广泛,危害严重,近年来在我国陆续有许多新种或新分离物报道。其中番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)是2008年报道的该属新种,与该属代表种番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)基因组结构相似,但是同源性较低。为了研究大颗粒病毒的胞间运动机理,我们对两种病毒的细胞病理学及胞间运动机理开展了研究。通过透射电子显微镜观察常温固定包埋和高压冷冻固定包埋两种方法处理的TSWV、TZSV感病植物叶片发现,两种病毒的形态及细胞病理变化大致相似,但也存在差异。与TSWV相比,TZSV对细胞器的影响更大。TZSV侵染的叶片在叶绿体处也能像TSWV一样产生囊泡,部分叶绿体的囊泡几乎占据整个叶绿体,片层结构破坏更加严重。在线粒体中也能够产生与叶绿体内相似的囊泡结构,这种现象在TSWV侵染的叶片内难以观察到,相比之下,TSWV侵染的叶片线粒体保存的更加完好。该结果也可以在一定程度上说明为什么在田间状态下,TZSV对作物造成的危害更加严重。为了研究TSWV、TZSV运动蛋白NSm的细胞定位。将两种病毒的NSm基因融合GFP后构建到植物双元表达载体pCHF3中,农杆菌介导浸润本氏烟叶片,同时将融合GFP的NSm基因利用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系转染昆虫Tn细胞。在激光共聚焦显微镜下观察NSm-GFP在烟草表皮细胞中和昆虫Tn细胞中的定位情况。观察发现与单独表达GFP在细胞壁周围和细胞核处均匀分布不同,TSWV、TZSV NSm-GFP融合蛋白会在植物细胞内扩散,能够在细胞壁边缘定位,并且在胞间连丝处呈不连续的绿色荧光小点,偶尔成对出现在相邻的两个细胞之间。TSWV的GFP-NSm融合蛋白能够在昆虫Tn细胞表面诱导产生数量众多的管状结构并向外延伸,长度远长于在胞间连丝处形成的NSm蛋白小管。TZSV的GFP-NSm融合蛋白也能在昆虫Tn细胞内表达,但是不能产生管状结构,主要分布在细胞质内,成团块状聚集；该蛋白也能在细胞核表面定位,呈网刺状,围绕着细胞核形成圆环形。为了进一步直观研究两种病毒的运动蛋白在亚细胞结构内的确切定位分布情况,利用大肠杆菌系统pET系列载体表达了TSWV、TZSV的NSm基因,以Ni2+-NTA agarose亲和柱分别纯化了这两个蛋白与His组氨酸的融合蛋白并制备了相应的多克隆抗体。其中,TSWV NSm蛋白制备的多克隆抗血清进行Western blot结果显示,抗血清对该蛋白具有特异性反应,可用于进一步免疫胶体金标记分析。而TZSV Nsm蛋白的抗血清正在制备过程中,结果暂不显示。