人类巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)是引起孕妇活动性感染及胎儿宫内感染最常见、也是危害最大的病毒之一。它可在感染孕妇后经胎盘或上行性感染传播给胎儿,导致流产、死胎、畸形及出生后多器官功能障碍等严重后果。传统ELISA法的敏感性和特异性均不能满足临床要求,而荧光定量PCR (FQ-PCR)技术也存在着对技术设备要求高,检测成本昂贵等缺点。本研究目的在于建立一种灵敏度高、特异性强的低成本检测孕妇血清中HCMV DNA的方法并初步评价该技术在临床应用价值。我们采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification ,LAMP)技术建立了快速检测孕妇血清中的HCMV DNA的反应体系。该方法在HCMV的IE1基因区段设计了二对特异性引物,在Bst DNA聚合酶作用下60℃恒温反应60分钟即可完成对HCMV DNA扩增过程。扩增产物以2.5%琼脂糖凝胶电泳检测。为确立了最佳反应条件我们对LAMP反应体系进行了优化。实验表明温度是LAMP的最大影响因素,而镁离子和甜菜碱浓度对反应影响不大。为评价该技术的特异性,我们使用设计的特异HCMV引物同时对HCMV、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型及人类基因组DNA进行LAMP扩增。仅HCMV DNA扩增产物在电泳后出现特异的梯状条带,进一步对该扩增产物的酶切结果也与预期相符。这表明LAMP技术对孕妇血清中HCMV DNA的扩增是特异的。我们对原始模板进行梯度稀释来测试其敏感性,实验结果表明LAMP技术可以稳定检出HCMV DNA的下限为102拷贝/ml。应用LAMP方法对126例孕妇血清进行HCMV DNA检测并将结果与ELISA和FQ-PCR法相比较。结果显示在126例样本中,LAMP法、ELISA和FQ-PCR三种方法分别检出的42例、14例及44例。ELISA法与FQ-PCR阳性符合率31.8%,两种方法存在显著性差异(P<0 01);LAMP法与FQ-PCR阳性符合率95.4%,差异不显著(P >0.01)。因此我们的实验表明LAMP技术用于孕妇血清中HCMV DNA检测具有与FQ-PCR相近的特异性和敏感性,可靠性远高于目前普及的ELISA法。并且LAMP所具有操作简单快速,结果易判断和不需要复杂技术及设备的低成本优势也是FQ-PCR所不能及的。如果进一步优化、完善和推广,我们相信该技术将会在孕妇HCMV感染的早期诊断和出生缺陷及传染病的预防上发挥重要作用。