MiR-155调节溃疡性结肠炎肠道Th17细胞分化及复方苦参汤影响作用研究

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研究目的:  溃疡性结肠炎是一类反复出现粘液脓血便,伴有腹痛,腹泻等症状的炎症性肠病。多年研究发现其发病与自身免疫系统有着密切关系,其中Th17细胞的功能异常在溃疡性结肠炎的发病过程中扮演者重要的角色。  目前许多研究也发现在溃疡性结肠炎发病过程中,Th17细胞的分化及功能异常与一类非编码RNA,即miRNAs密切相关。其中miR-155在影响Th17细胞的分化及功能方面有着重要的作用。但miR-155在溃疡性结肠炎结肠粘膜中对Th17细胞分化及功能影响的具体机制尚不完全清楚。  本实验的目的为,在TNBS诱导的大鼠结肠炎模型中,探究miR-155在结肠验证过程中对Th17细胞分化及功能的影响作用,以及复方苦参汤在此过程中的影响作用研究。本实验不仅探究了溃疡性结肠炎发病的可能机制,而且为溃疡性结肠炎探索了新的治疗方式。  研究方法:  SDF级大鼠60只(6-8周)随机分为六组,分别为正常对照组、模型组、miR-155inhibition组、阴性病毒对照组、美沙拉嗪组、复方苦参汤组。实验开始第一天给予正常组以外五组大鼠TNBS灌肠造模。造模第三天给予miR-155inhibition组及阴性病毒对照组相应病毒灌肠,从第三天开始美沙拉嗪组大鼠每日给予美沙拉嗪灌胃,复方苦参汤组大鼠每日给予中药复方苦参汤灌胃。实验第十天,各组大鼠麻醉后处死,取脾脏及肠系膜淋巴结做流式细胞学检测Th17细胞含量;取各组大鼠结肠组织固定后行HE染色及免疫组化测定Jarid2含量;原位杂交测miR-155表达;冰冻切片观察病毒摄取;ELISA测结肠组织中IL-17A、IL-17F、TGF-β、IL-6、IL-21的蛋白含量;PCR测结肠组织中TGF-β、IL-6、ROR-γt、notch1及Jarid2的mRNA和miR-155的含量;western blot测Jarid2和notch1的蛋白含量。  研究结果:  TNBS造模后,观察各组大鼠体重计大便情况测得DAI,与正常组比较,实验前三天,其与各组大鼠DAI明显上升,说明造模成功。第三天干预后,与模型组比较,miR-155inhibition组、复方苦参汤组及美沙拉嗪组DAI明显下降。与正常组相比较,模型组脾脏及肠系膜淋巴结Th17细胞的比例明显增高(P<0,05),Th17细胞分化及功能相关的细胞因子IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-6的蛋白含量明显升高(P<0,05),TGF-β含量明显降低(P<0,05),IL-6、ROR-γt的mRNA及miR-155的表达也明显升高(P<0,05),TGF-β的mRNA含量明显降低(P<0,05)。与模型组相比较,miR-155inhibition组、美沙拉嗪组及复方苦参汤组上述因子蛋白或mRNA的表达除TGF-β外均明显降低(P<0,05),TGF-β蛋白和mRNA表达则明显升高(P<0,05)。与正常相比较,模型组结肠中Jarid2的蛋白及mRNA表达明显下降(P<0,05),而notch1的蛋白及mRNA表达则明显升高(P<0,05)。与模型组相比较,miR-155inhibition组、美沙拉嗪组及复方苦参汤组结肠中Jarid2的蛋白及mRNA表达明显升高(P<0,05),而notch1的蛋白及mRNA表达则明显降低(P<0,05)。  研究结论:  1、miR-155参与TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠炎症的发生发展过程中;2、miR-155inhibition可以缓解TNBS诱导的溃疡性结肠;3、miR-155影响TNBS诱导大鼠结肠炎结肠粘膜组织中Th17细胞的分化及功能;4、miR-155可能通过Jarid2/notch1轴影响Th17细胞的分化;5、复方苦参汤可影响mRNA-155的表达并缓解TNBS诱导的溃疡性结肠炎。
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