沙丁胺醇酶联免疫分析及胶体金免疫层析方法的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:linxinrudo
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本论文对食用猪肉中禁用药物沙丁胺醇的酶联免疫分析方法以及胶体金免疫层析检测方法进行了系统研究和分析。制备出沙丁胺醇丁二酸作为半抗原,混合酸酐法制备出免疫原SAL-KLH和SAL-HRP,碳二亚胺法制备包被原SAL-OVA,免疫后得到高效价和高灵敏度的沙丁胺醇多克隆抗体。通过优化各项实验条件,建立了简便、快捷、实用的沙丁胺醇直接竞争酶联免疫(ELISA)分析方法,此法灵敏度IC50=0.80±0.10μg/L;检出限IC15=0.06±0.02μg/L。对所建立方法的性能指标进行了系统评价,考察了方法检出限、精密度、准确度,批间和批内变异系数均小于20%。以猪肉为例,确定了肉类食品的基质的处理方法,用稀释的方法消除基质可有效消除基质影响,实际样品的检出限为0.60μg/kg。测定了7.0μg/kg、24.0μg/kg、50.0μg/kg三个添加浓度的检测,回收率在85%~100%之间。同时建立了沙丁胺醇胶体金免疫层析方法,进过优化得到方法的检出限为1.00μg/L,同样选取猪肉作为检测样品,经0.22μm微孔滤膜过滤后直接上样检测,在实际样品中的检出限为10.00μg/L。分别向猪肉样品中添加三个浓度的沙丁胺醇,即7μg/kg、50μg/kg、100μg/kg;同时采用两种方法进行检测沙丁胺醇标准品,经胶体金免疫层析法与直接竞争酶联免疫分析方法同时检测,结果一致性较好,验证了方法的准确性。
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