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目的1.观察低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)向平滑肌样细胞的转分化;2.利用RNA干扰技术阻断myocardin基因的表达,研究myocardin在PAECs向平滑肌样细胞的转分化中的作用;3.探讨sildenafil在PAECs向平滑肌样细胞的转分化中作用和其可能机制。方法本实验分离培养猪肺动脉内皮细胞,经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化;构建psimyocardinRNA表达载体抑制myocardin基因的表达。纯化的PAECs分组为:常氧组(N):置于含21%O2,5%CO2,74%N2的CO2培养箱中;低氧组(N):置于含1%O2,5%CO2,94%N2的低氧培养箱中;常氧+psimyocardinRNA抑制组(N+pSi);低氧+psimyocardinRNA抑制组(H+pSi); (以上各组分别培养1d,4d,7d)常氧+sildenafil 20μg/ml组(N+S);低氧+sildenafil 20μg/ml组(H+S); (此两组分别培养1d和7d)。用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果1.免疫荧光检测PAECs中α-SM-actin阳性率在低氧4 d组(0.96‰±0.08)明显低于低氧7 d组(2.07‰±0.06)(P<0.05),阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-actin的阳性表达;2. RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组(0.14±0.01)明显低于低氧7 d组(0.23±0.03)(P<0.05),常氧组和低氧1d组均未检测出其表达。3. RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4d组(0.03±0.02)和低氧7d组(0.05±0.01)(P<0.05);平滑肌样细胞的转分化率也明显降低(0.19‰±0.07;0.21‰±0.04;P<0.05)。4.用sildenafil处理后,平滑肌样细胞的转分化率明显低于对应低氧7d组(1.02‰±0.05;P<0.05);Myocardin mRNA水平明显也明显低于对应低氧7d组(0.09±0.02)(P<0.05)。结论由此我们认为PAECs中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化;Myocardin在此转分化过程中起重要作用;此外sildenafil在一定程度上可抑制其转分化,其机制可能是通过抑制myocardin基因的表达而实现的。