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竹子是禾本科,竹亚科多年生常绿植物,在我国具有悠久的食用和药用历史。为了加强对竹叶的综合利用,本研究以毛竹为研究对象,对竹叶多糖的提取、纯化、检测及活性进行研究,通过单因素试验和正交试验考察了温度、时间、固液比、提取次数对多糖提取率的影响,同时对水提取、超声波提取和微波提取三种提取方法进行了比较,利用葡聚糖凝胶和纤维素柱层析分离技术对多糖进行纯化,并运用薄层色谱和气相色谱考察了其单糖组成,采用高通量药物筛选模型对多糖的抗肿瘤活性进行了探讨,试验结果如下: 1 建立了苯酚-硫酸法测定竹叶多糖含量的方法。在波长为490nm,以无水葡萄糖为对照品,20~100μg/ml范围内,浓度和吸光度呈良好的线性关系,回归方程为Y=7.275X+0.0004,相关系数R~2为0.9989。 2 优化了竹叶多糖提取工艺参数,首次将超声波和微波技术应用到竹叶多糖的提取工艺,得到其最佳提取条件,水提最佳浸提参数为:温度80℃,时间90min,固液比1∶25,浸提3次,多糖得率为0.661%;超声波提取最佳浸提参数为:温度70℃,时间20min,固液比1∶20,浸提3次,多糖得率为0.708%;微波提取最佳浸提参数为:微波功率500W,固液比1∶15,时间2min,浸提3次,多糖得率为0.655%。 3 竹叶粗多糖经Sevag法脱蛋白,DEAE-纤维素柱层析,以浓度为0、0.05M、0.1M、0.3M、0.5M的NaCl溶液梯度洗脱,得到四个竹叶多糖(Bamboo polysaccharide,BPS):BPS1、BPS2、BPS3、BPS4,其得率分别为46.45%、4.31%、1.62%、0.53%;BPS1再经DEAE-纤维素、Sephadex G-75凝胶柱层析得到BPS11;用Sephadex G-100柱层析鉴定了它们的纯度,用HPTLC和GC测定了它们的单糖组成为:鼠李糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=2.91:9.27:4.42:6.38:25.59:9.44。 4 运用高通量药物筛选模型对竹叶多糖的抗肿瘤活性进行了考察,结果表明,在竹叶多糖剂量为10μg/ml时,对THP-1(单核细胞白血病细胞株)肿瘤细胞有抑制作用。