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植物D类周期蛋白控制细胞周期的进程,在细胞的分裂过程中起重要作用。以杨树CYCD1;1、CYCD3;3周期蛋白基因作为研究对象,构建植物抑制表达载体pCAMBIA1301-CYCD1;1-RNAi(以下简称p1301-D1;1-RNAi)转化Poptr;CYCD1;1的过表达烟草、野生型杨树,来研究Poptr;CYCD1;1的功能。克隆并验证Poptr;CYCD3;3的启动子特征,利用农杆菌介导的花絮侵染法转化拟南芥分析Poptr;CYCD3;3基因表达的组织特异性。构建融合荧光蛋白psGFP-Poptr;CYCD3;3,利用基因枪介导法导入洋葱表皮细胞,对Poptr;CYCD3;3蛋白进行亚细胞定位研究。利用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草,来研究Poptr;CYCD3;3基因的过表达对烟草生长发育和细胞的分化的影响,结果表明：1、用p1301-D1;1-RNAi载体转化Poptr;CYCDl;1过表达烟草,得到20株转基因株系,经PCR、定量、半定量、Northern检测,表明Poptr;CYCD1;1的表达量明显降低,过表达烟草又几乎恢复野生型的性状,说明该抑制表达载体是有效的,可用于后续实验。2、用抑制表达载体p1301-CYCD1;1-RNAi转化野生型杨树,得到8个转基因株系,经PCR、定量、半定量、Northern检测,证明Poptr;CYCD1;1的表达量已经下降,对生长50天的转基因幼苗与WT杨树的茎、叶做石蜡切片进行组织学观察,性状差异不明显,还有待进一步观察研究。3、Poptr;CYCD3;3基因开放读码框全长为1161bp,共编码386个氨基酸,该基因编码蛋白的分子量为97634.3,等电点为5.04,Poptr;CYCD3;3基因的同源性与蓖麻的最为接近。4、融合蛋白CYCD3;3-GFP的绿色荧光信号集中在细胞核内,而对照组GFP信号弥散在整个细胞内,说明Poptr;CYCD3;3是一个细胞核定位的蛋白。5、构建植物表达载体pCAMBIAl301-Promoter:CYCD3;3侵染拟南芥,筛选检测后,将萌发7天的拟南芥进行GUS染色分析,结果表明：Poptr;CYCD3;3基因的表达模式主要集中在生长点表达。6、构建植物表达载体pROKⅡ-Poptr;CYCD3;3,经农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,通过卡那霉素的筛选获得20株转基因株系,对其进行PCR检测,结果表明基因能够在烟草植株中表达。但从组培苗到生根苗与同期野生型烟草对照,性状不明显,有待观察研究。