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研究背景鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方头颈部常见的恶性肿瘤之一,多数鼻咽癌分化差,95%为低分化鳞癌,恶性程度高,严重影响人类的生命健康。目前,鼻咽癌的临床治疗主要以放疗和化疗为主。顺铂是鼻咽癌临床化疗的一线用药,但在化疗过程中常诱发鼻咽癌耐药,严重影响鼻咽癌的治疗效果及预后。因此,探明鼻咽癌顺铂耐药的机制,提高铂类药物的疗效,是鼻咽癌治疗的研究热点。Wnt/β-catenin信号通路的异常激活参与鼻咽癌的化疗耐药。细胞浆内的β-catenin的稳定性在Wnt/β-catenin信号通路异常激活中起主导作用,β-catenin在多种恶性肿瘤中存在异常过表达,但是其发生突变的概率并不高,所以Wnt/β-catenin信号通路的异常激活可能是由于位于β-catenin上游的基因发生突变导致的。散乱蛋白(Dishevelled,DVL)是位于β-catenin上游的一个至关重要的正向调节因子。在Wnt/β-catenin信号通路中,活化后的DVL可促使β-catenin在胞质内积聚和核转移,从而激活转录因子TCF/LEF诱导靶基因的表达。研究发现,DVL蛋白在多种恶性肿瘤中高表达并参与其恶性行为。目前,国内外鲜有报道关于DVL家族各成员的表达与鼻咽癌细胞对顺铂化疗耐药的研究。目的明确顺铂对鼻咽癌细胞DVL2、DVL3表达的影响;探明DVL2、DVL3对鼻咽癌细胞顺铂化疗耐药的影响,为进一步研究DVL2、DVL3在肿瘤化疗耐药中的具体作用机制及有效逆转鼻咽癌耐药奠定前期基础。方法1.不同浓度(0,4,8μmol/L)的顺铂作用鼻咽癌细胞48h后,Western blotting实验检测鼻咽癌细胞中DVL2、DVL3蛋白的表达变化。2.转染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3至鼻咽癌细胞,并用不同浓度(0,1,2,4,8,10,20μmol/L)的顺铂处理细胞,MTT检测过表达DVL2、DVL3对鼻咽癌细胞顺铂抑制率及半数抑制浓度(IC50)的影响。3.转染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3至鼻咽癌细胞,并用10μmol/L的顺铂处理细胞,流式细胞术检测过表达DVL2、DVL3对顺铂的鼻咽癌细胞凋亡的影响。4.转染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3与sh RNA-DVL2、sh RNA-DVL3至鼻咽癌细胞,Western blotting实验检测过表达与沉默DVL2、DVL3对鼻咽癌细胞中P-gp、Survivin以及β-catenin蛋白的影响。结果1.顺铂化疗可以诱导鼻咽癌细胞中DVL2、DVL3的蛋白表达,且有浓度依赖性。2.过表达DVL2、DVL3均降低了顺铂对鼻咽癌细胞的抑制率,提高了其IC50。3.过表达DVL2、DVL3均降低了顺铂诱导的鼻咽癌细胞的凋亡。4.在鼻咽癌细胞中过表达与沉默DVL2、DVL3均增加与降低了β-catenin及其靶基因P-gp、Survivin的蛋白表达。结论顺铂上调鼻咽癌细胞中DVL2、DVL3的蛋白表达;过表达DVL2、DVL3均可增强鼻咽癌细胞对顺铂的耐受,抑制顺铂诱导的细胞凋亡;进一步研究显示DVL2、DVL3均可通过调控Wnt/β-catenin信号介导耐药相关蛋白P-gp、Survivin的表达,从而诱发鼻咽癌顺铂耐药。