利用大蒜离体鳞芽和活体花苞诱导四倍体的研究

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大蒜(Allium sativum L.)有性杂交困难,自然变异有限,多倍体育种成为无性繁殖大蒜作物改良品种的有效途径之一。本文采用大蒜离体鳞芽和活体花苞为试验材料,通过秋水仙素浸泡鳞芽和注射花苞腔的方法,进行四倍体诱导。建立了大蒜离体鳞芽和气生鳞茎不定芽途径再生体系,同时研究了秋水仙素对鳞芽、花苞及其生长发育的影响,并对再生苗进行了倍性鉴定和移栽驯化,以期获得四倍体大蒜植株。主要研究结果如下:1首先用正交设计法研究NAA、6-BA、KT和鳞芽厚度对金蒜3号离体鳞芽单芽诱导的影响,并用得到的最优组合对用0.10%,0.15%和0.20%浓度秋水仙素浸泡24h,48h和72h的金蒜3号离体鳞芽进行培养,当再生试管苗形成后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,在离体鳞芽单芽诱导影响中,鳞芽厚度影响最大,6-BA和KT次之,NAA最小;得到的最优外源激素组合为0.05mg·L-1NAA+2mg·L-1KT和最优鳞芽切取的厚度为6.0mm,且在最优组合下培养鳞芽,单芽诱导率达100%。秋水仙素处理前,在添加有0.05mg·L-1NAA和2mg·L-1KT的MS培养基中培养6.0mm离体鳞芽1d后有再生单芽萌动;秋水仙素处理后,将其转接在加有0.05mg·L-1NAA和2mg·L-1KT的MS培养基中培养经30d后部分鳞芽生根成苞(图6-b)和部分鳞芽生根成苗。且在同一浓度下,随着秋水仙素浸泡时间的延长,鳞芽成苞率和成苗率随之降低;在同一浸泡时间下,随着秋水仙素浓度的增大,鳞芽成苞率和成苗率也随之降低。在获得的76颗试管苗中,鉴定发现有14颗是四倍体试管苗,经驯化移栽成活了2颗。2用0.05%,0.10%,0.15%和0.20%的秋水仙素注射苍山糙蒜品种和金蒜3号品种的花苞,并在不同生长调节剂组合的MS培养基下培养花苞内形成的气生鳞茎,当再生体系建立后,对根尖进行倍性鉴定。结果表明,MS基本培养基添加0.05mg·L-1NAA和2.0mg·L-1KT能诱导较多的气生鳞茎萌发,4-5mm直径的气生鳞茎萌发率最高,且苍山糙蒜气生鳞茎的萌发率整体比金蒜3号高。秋水仙素注射花苞后,金蒜3号的花苞死亡率远远高于苍山糙蒜。随着秋水仙素浓度增大,花苞内形成气生鳞茎数及大小均有所降低,染色体加倍率升高。苍山糙蒜以0.20%秋水仙素浓度下四倍体诱导率最高,为7.69%;金蒜3号以0.15%秋水仙素浓度下四倍体诱导率最高,为11.76%。再生试管苗经驯化移栽成活了3颗。
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