【摘 要】
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目的探讨miR-335表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。并探讨MM细胞株U266中mi R-335启动子区甲基化水平对U266细胞迁移能力的影响。方法用SYBR GreenⅠ荧光定
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目的探讨miR-335表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。并探讨MM细胞株U266中mi R-335启动子区甲基化水平对U266细胞迁移能力的影响。方法用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测43例MM患者和30例健康对照者PBMC中miR-335的表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-335启动子区甲基化水平,并分析它们与其他临床指标的相关性。对U266进行去甲基化药物(5-AzadC)处理、转染hsa-miR-335的模拟物和抑制物以及阴性对照,使用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测各组miR-335的表达水平;通过Transwell小室检测各组细胞的迁移能力;利用Western Blot检测miR-335模拟物组、抑制物组以及阴性对照组细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平。结果43例MM患者中,miR-335的相对表达量34.8(15.3~84.9),显著低于健康对照者269.4(63.3~780.2)(Z=4.384,P<0.05)。11例患者(25.6%)呈现完全甲基化,其余患者均为部分甲基化,而在健康对照者中,23例(76.7%)呈现完全非甲基化(Uc=6.62,P<0.05)。初诊患mi R-335表达量高于复发/进展期患者(Z=2.309,P<0.05),而复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度(75%),高于初诊患者(25%),T=24.5,P<0.05。MM患者miR-335的表达水平与轻链λ浓度呈正相关(P<0.05,r=0.51)。U266细胞株中miR-335启动子区呈完全甲基化状态,去甲基化药物处理后,miR-335表达水平升高。去甲基化药物处理、hsa-miR-335模拟物转染后,细胞的迁移能力明显下降。hsa-miR-335模拟物转染后MMP-2表达减少。结论MM患者miR-335表达水平和甲基化水平可作为MM潜在的辅助诊断指标。其启动子区的高甲基化能够沉默miRNA分子表达,从而促进细胞迁移。
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