海洋中药厚藤的质量控制方法研究

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目的:研究海洋中药厚藤的质量控制方法,建立厚藤的质量标准。方法:以咖啡酸为对照品,考察厚藤的提取溶媒、显色剂、展开剂、温度、湿度对厚藤TLC色谱图的影响,建立厚藤的薄层鉴别方法;参照2015版《中国药典》第四部测定厚藤的水分、总灰分、浸出物含量;以6个活性成分的总含量为考察指标,采用响应面优化法优化提取工艺;采用HPLC法测定不同产地、不同采集时间厚藤药材中6个活性成分的含量;建立厚藤的HPLC指纹图谱及UPLC指纹图谱,采用相似性软件及SPSS19.0对厚藤的HPLC及UPLC指纹图谱分别进行相似度分析、聚类分析及主成分分析。结果:(1)建立了厚藤药材的薄层色谱鉴别方法:以咖啡酸为对照品,以80%乙酸乙酯为提取溶剂,以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(6:2:1:0.15)为展开系统,以1%铁氰化钾-2%三氯化铁为显色剂,温度25℃,湿度50%,对厚藤进行薄层鉴别,该薄层色谱鉴别法具有较好的专属性;(2)建立了厚藤药材中水分、灰分、浸出物的测定方法,提出了建议限度:暂定不同产地厚藤地上部位的水分含量应不得超过12.0%,总灰分含量不得过16%,热浸法水溶性浸出物不得低于19%,冷浸法水溶性浸出物应不得少于14%,热浸法醇溶性浸出物测定法应不得少于20%,冷浸法醇溶性浸出物应不得少于15%;(3)优化了厚藤药材的最佳提取工艺:乙醇浓度69%,乙醇体积63m L,提取时间1.5h,提取3次,水浴回流温度90℃;(4)建立了厚藤药材的含量测定方法。20批厚藤的绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量范围分别为:0.7604~12.7981 mɡ/ɡ,0.1117~0.7826mɡ/ɡ,0.1906~1.2785 mɡ/ɡ,0.9892~7.6556 mɡ/ɡ,2.6974~17.2133 mɡ/ɡ,1.9225~9.5335 mɡ/ɡ;(5)建立了厚藤药材HPLC和UPLC指纹图谱,指认了不同产地厚藤HPLC及UPLC指纹图谱中的绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等色谱峰。厚藤HPLC指纹图谱有13个共有峰,各批次与厚藤HPLC共有模式的相似度为0.956~1.000,根据分析结果生成两类厚藤的共有模式;UPLC指纹图谱有16个共有峰,各批次与厚藤UPLC共有模式的相似度为0.945~1.000,根据分析结果生成三类厚藤的共有模式;结论:本研究采用响应面优化技术及多种色谱技术,运用相似度分析、聚类分析及主成分分析等化学计量学方法从厚藤的提取工艺、薄层色谱鉴别、指标成分含量测定、HPLC和UPLC指纹图谱、常规项目检查等方面对厚藤药材的质量控制技术进行了研究,初步建立了厚藤的质量控制及评价方法,为建立海洋中药厚藤的质量标准提供了科学的实验依据。
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