卵巢蒂扭转保守性手术治疗时间的探讨及血府逐瘀汤对复位后卵巢的影响

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目的(1)探讨兔子卵巢蒂扭转后不同时间颗粒细胞凋亡及与Bax表达的关系,用实验数据验证卵巢蒂扭转后保守性手术治疗的最佳时间。(2)探讨血府逐瘀汤在卵巢保守性治疗后的作用。方法(1)建立兔子卵巢蒂扭转的模型:采用雌性性成熟日本大耳白兔40只,4-5kg/只,于常规麻醉消毒后取下腹正中线切口,将左侧卵巢顺时针方向扭转540度,用6-0vicryl固定于同侧侧腹壁,右侧卵巢未预任何处理,用四号线逐层缝合关腹。(2)分组:将40只SD性成熟大耳白兔随机分成四组,每组10只,分别于术后即时、24h、36h、48h扭转复位;每组再分为2小组(各5只):一组于复位后给予蒸馏水每天一次,灌胃体积10ml/kg,连续一周后处死(扭转组);一组给予中药血府逐瘀汤[含生药7.10g/(kg·d)],按家兔及人体积比计算,相当于成人用药剂量的两倍,每天一次,灌胃体积同蒸馏水,连续一周后处死(扭转+中药组)。采用扭转组中相同兔子的右侧卵巢(未处理)作为对照组。切下各组处死后兔子的双侧卵巢组织,进行后续实验。采用实时定量PCR(聚合酶链式反应)法及免疫组织化学法检测Bax的表达;TUNEL(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)法检测颗粒细胞凋亡情况。结果雌性性成熟日本大耳白兔在卵巢蒂扭转后,实时定量PCR法检测各组卵巢组织中Bax mRNA的表达显示:与手术即时(Oh)比较,扭转组及扭转+中药组在24h、36h、48h时Bax mRNA的表达增加,且差异显著,均有统计学意义(P<0.05),并且随时间的延长Bax mRNA的表达逐渐增加,于36h达高峰,第48h有所下降。与对照组相比,扭转组及扭转+中药组Bax mRNA的表达均有所增加,且在卵巢蒂扭转后24h、36h、48h均有统计学意义(P<0.05);但与扭转组比较,扭转+中药组第24h、36h、48h Bax mRNA的表达均有所下降,且在卵巢蒂扭转后第36h、48h有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学法检测Bax的表达显示:与手术即时(0h)比较,扭转组及扭转+中药组在24h、36h、48h时Bax的表达增加,且差异显著,均有统计学意义(P<0.05),且Bax的表达随扭转时间的增加而增加,于扭转后笫36h达高峰,第48h开始下降;与对照组比较,扭转组及扭转+中药组Bax的表达均有所增加,且在卵巢蒂扭转后第24h、36h、48h均有统计学意义(P<0.05),但与扭转组比较,扭转+中药组Bax的表达在卵巢蒂扭转后第24h、36h、48h均有所下降,且有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测颗粒细胞凋亡显示:与手术即时(Oh)比较,扭转组有所转+中药组在24h、36h、48h时颗粒细胞凋亡增加,且差异显著,均有统一学意义(P<0.05),并随时间延长颗粒细胞凋亡逐渐增加,于第36h达高峰,第48h有所下降,并可见局部颗粒细胞坏死;与对照组相比,扭转组及扭转+中药组颗粒细胞凋亡均有所增加,且在卵巢蒂扭转后24h、36h、48h均有统计学意义(P<0.05);但与扭转组比较,扭转+中药组在第24h、36h、48h颗粒细胞凋亡均有所下降,且具有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢蒂扭转后可诱导颗粒细胞发生凋亡,其机制与Bax的激活有关;血府逐瘀汤可通过改善血液流变性及微循环从而降低卵巢组织蒂扭转后缺血再灌注损伤的程度,促进复位后卵巢功能的恢复。同时根据实时定量PCR法、免疫组织化学法及TUNEL法检测结果提示:(1)卵巢蒂扭转后,复位卵巢并保留卵巢的保守性手术治疗的最佳时机是扭转36h以内,而且时间越早越好;(2)血府逐瘀汤可促进保守性手术后卵巢功能的恢复。
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