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褐藻聚糖硫酸酯是一种水溶性杂多糖,不易被身体吸收利用,而褐藻聚糖硫酸酯寡糖具有分子量小,易被机体吸收等特点,目前越来越多的研究致力于寡糖的制备及其生物活性,本研究以笼目海带的褐藻聚糖硫酸酯为原料,通过高温辅助酸解降解出低分子量褐藻聚糖硫酸酯,通过膜分离技术,分离出五个组分,并对其降解组分的抗炎、抗氧化活性以及消化规律进行了研究,结果如下:
1、笼目海带褐藻聚糖硫酸酯经0.2mol/L硫酸降解得到粗寡糖,经过SephadexG-50凝胶柱对酸解pH、酸解温度和酸解时间三个条件进行单因素讨论,经讨论初步得到pH为2、温度120℃以及时间为2h,进行27组实验,通过薄层层析法和凝胶柱相结合,确定pH为3、温度110℃、时间3h为最佳降解条件,利用膜分离技术对降解产物进行分离纯化,得到五个组分F1-F5,对其五个组分进行单糖组成分析,F1-F5组分均为硫酸岩藻糖,含有大量的岩藻糖,其中F2组分岩藻糖含量达到70.628%,通过红外及质谱分析,F3、F4和F5均为聚合度1~5的硫酸岩藻寡糖,F3以岩藻二糖(Fuc2S1、Fuc2S2、Fuc2S3)和三糖(Fuc3S3、Fuc3S4)为主,F4和F5均以岩藻单糖(Fuc1S1、Fuc1S2)和二糖(Fuc2S1、Fuc2S2、Fuc2S3)为主。
2、LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型及H2O2诱导的RAW264.7细胞氧化模型,通过MTT法,ELISA和Griess法检测细胞存活率、NO含量,IL-6,IL-8,IL-1β,TNF-α含量,发现F1-F5组分以及粗品多糖F组分对细胞增殖活性并没有太大影响,各组分具有抗炎活性;经过0.2mmol/mLH2O2处理的RAW264.7细胞培养液中GSH和CAT含量显著降低,各组分均能够提高细胞培养液中GSH和CAT活性,具有抗氧化活性。
3、通过体外胃肠模拟实验,讨论降解产物的消化产物,将消化产物经过高效液相分析单糖组成,再用DNS法检测还原糖的变化,实验结果说明:F和F1-F5组分经过HPLC分析都产生游离单糖,主要发生在胃液消化部分,其中F1-F5组分较F组分产生的单糖峰面积大,说明F1-F5组分可以更好的被人体吸收利用;F4组分在模拟胃液中生成较多的还原糖,而F组分产生了少量的还原糖。
1、笼目海带褐藻聚糖硫酸酯经0.2mol/L硫酸降解得到粗寡糖,经过SephadexG-50凝胶柱对酸解pH、酸解温度和酸解时间三个条件进行单因素讨论,经讨论初步得到pH为2、温度120℃以及时间为2h,进行27组实验,通过薄层层析法和凝胶柱相结合,确定pH为3、温度110℃、时间3h为最佳降解条件,利用膜分离技术对降解产物进行分离纯化,得到五个组分F1-F5,对其五个组分进行单糖组成分析,F1-F5组分均为硫酸岩藻糖,含有大量的岩藻糖,其中F2组分岩藻糖含量达到70.628%,通过红外及质谱分析,F3、F4和F5均为聚合度1~5的硫酸岩藻寡糖,F3以岩藻二糖(Fuc2S1、Fuc2S2、Fuc2S3)和三糖(Fuc3S3、Fuc3S4)为主,F4和F5均以岩藻单糖(Fuc1S1、Fuc1S2)和二糖(Fuc2S1、Fuc2S2、Fuc2S3)为主。
2、LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型及H2O2诱导的RAW264.7细胞氧化模型,通过MTT法,ELISA和Griess法检测细胞存活率、NO含量,IL-6,IL-8,IL-1β,TNF-α含量,发现F1-F5组分以及粗品多糖F组分对细胞增殖活性并没有太大影响,各组分具有抗炎活性;经过0.2mmol/mLH2O2处理的RAW264.7细胞培养液中GSH和CAT含量显著降低,各组分均能够提高细胞培养液中GSH和CAT活性,具有抗氧化活性。
3、通过体外胃肠模拟实验,讨论降解产物的消化产物,将消化产物经过高效液相分析单糖组成,再用DNS法检测还原糖的变化,实验结果说明:F和F1-F5组分经过HPLC分析都产生游离单糖,主要发生在胃液消化部分,其中F1-F5组分较F组分产生的单糖峰面积大,说明F1-F5组分可以更好的被人体吸收利用;F4组分在模拟胃液中生成较多的还原糖,而F组分产生了少量的还原糖。