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本试验探宄日粮中添加芳香族氨基酸——色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸(Tryptophan,Phenylalanine,Tyrosine; TPT)对钙敏感受体(Calcium-sensingreceptor,CaSR)信号通路和仔猪肠道炎症反应的调控作用,并深入研究CaSR在TPT调控仔猪肠道炎症反应中的作用机理。 (1)选取40头体重相近的二元杂(长×大)断奶仔猪,采用2×2双因素试验设计,按照日粮[对照日粮或TPT日粮(添加0.16% Trp+0.41%Phe+0.22%Tyr)]和炎症模型[腹腔注射生理盐水或脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)]分组。于试验第21天,各日粮处理仔猪腹腔注射LPS(100μg/kg BW)或等体积生理盐水。4h后,仔猪麻醉,颈静脉采血,屠宰,采集肠道样品。试验结果表明:注射LPS显著提高仔猪直肠温度、肠道组织病理学打分以及结肠髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)含量(P<0.05),而日粮添加TPT能够缓解LPS诱导的组织病理学损伤,显著降低LPS诱导产生的MPO。日粮添加TPT可显著降低LPS处理仔猪血清中IL1β、IL6、IL8、IL12、GM-CSF和TNFα等促炎性细胞因子含量以及肠道组织中IL8、GM-CSF、IL1β等促炎性细胞因子mRNA丰度,而显著提高IL4和TGFβ等抗炎性细胞因子水平(P<0.05);添加TPT能够显著提高CaSR和PLCβ2的蛋白表达水平,降低LPS处理仔猪的p-NF-κB、IKKα/β和IκB蛋白表达水平(P<0.05)。综上结果,日粮添加TPT能缓解LPS诱导的仔猪肠道炎症,可能与其激活CaSR信号通路和抑制NF-κB信号通路有关。 (2)利用LPS(100μg/ml)诱导的猪肠上皮细胞(Intestinal porcine epithelialcells-J2,IPEC-J2)炎症模型,NPS2134(0.8μM)和R568(0.05μM)分别阻断和激动CaSR,不同TPT水平(0.08 mM Trp+0.4 mM Phe+0.4 mM Tyr或0.16mM Trp+0.8 mM Phe+0.8 mM Tyr)培养细胞。结果表明:LPS处理显著促进细胞凋亡,并上调TNFα、IL6、GM-CSF和MCP1/CCL2等促炎性因子mRNA水平(P<0.05); CaSR激动剂R568显著降低IL1α、IL6、GM-CSF等促炎性细胞因子mRNA水平(P<0.05);而CaSR抑制剂NPS-2134显著提高IL1α、IL18、IL8等促炎性细胞因子mRNA水平(P<0.05);增加培养基TPT浓度能提高CaSR蛋白表达水平而降低IκB蛋白表达水平,抑制NF-κB核转移,降低IL1β、IL6、GM-CSF等促炎性因子mRNA水平,缓解LPS诱导的猪肠上皮细胞IPEC-J2炎症反应(P<0.05);而NPS-2134阻断CaSR信号通路后,添加TPT显著降低CaSR蛋白表达水平而提高p-NF-κB和IκB蛋白水平。以上结果提示,TPT通过激活CaSR信号通路和抑制NF-κB信号通路缓解肠道炎症反应。 以上体内试验和体外实验的结果说明CaSR信号通路在芳香族氨基酸TPT缓解仔肠道炎症反应中发挥重要的作用。