论文部分内容阅读
经多年研究发现,对植物内生真菌次生代谢物的研究已经产生大量具有化学多样性和生物活性多样性化合物,所以新型生物活性化合物的产生对用于制药应用具有巨大的前景。现代基因组序列工具表明,并不是所有的基因簇在常规生长条件下都有规律地表达。为了进一步扩大单个菌株的化学多样性,将“(OSMAC)一株多种化合物”策略的调制效应改变培养条件可能对微生物的次生代谢产物的成分以及含量有影响。本论文主要基于OSMAC策略对球毛壳菌(Chaetomium globosum)和葡萄状穗霉菌(Stachybotrys sp.)的次生代谢成分及其活性的研究。论文主要分为三章:第一章主要基于OSMAC策略下内生真菌次生代谢产物研究进展,综述说明了多种培养基条件和基因筛选成功应用于微生物的代谢产物和生物合成研究,以及产生了多样化的微生物次生代谢物。第二章主要对菌株Chatomium globosum YNH-16的次生代谢成分及其活性的进行了研究,该菌株从云南丽江采集的水生植物水鳖Hydrocharis dubia中分离得到。基于OSMAC策略,将该菌株用山药培养基进行发酵。从该菌中分离鉴定得到13个化合物,其中包括2个新化合物:10,11-dihydroxylaureonitol(1)和yamchaetoglobosin A(2),以及11个已知化合物:ergos-terolperoxide(3),cerebrosides C(4),adenosine(5),uridine(6),aureonitol(7),orsellinic acid(8),orcinol(9),2-hydroxybenzoic acid(10),2-hydroxy phenyl acetic(11),tyrosol(12),styrene glycol(13)。对新化合物进行活性筛选,其中在50μM浓度下,化合物2具有明显的一氧化氮(NO)生成抑制活性(抑制率92.51±1.10%),化合物2对AChE有一定抑制活性(抑制率38.20%)。在40μM浓度下,化合物2对白血病HL-60细胞株抑制活性较强(抑制率96.22%)。抗凝血实验表明化合物1,2对凝血酶原时间(PT)均有微弱的延长,PT约16.8 s。第三章主要是对来自青藏高原土壤样品中菌株Stachybotrys sp.的次生代谢成分及其活性的进行了研究。分别用多种培养基(加2%乙酸、山药、臭参、雪莲果、察氏、改良马丁以及大米固体培养基)进行培养基条件TLC筛选。筛选后对菌株进行大米固体培养基扩大发酵。从该菌中分离鉴定了12个化合物,包括两个新的化合物bisabosqual E(1),bisabosqual F(2)以及10个已知化合物:2-hydroxybenzaldehyde(3),ergosterol(4),trans-so-brerol(5),1β,4β,7α-trihydroxyeu desmane(6),sterigmatocystin(7),averufin(8),(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-3β,5α,6β-triol(9),5,6-epoxy-22-en-3-ol-ergosterol(10),stachybotrylactam(11),和stachybotramide(12)。对化合物1和2进行活性筛选,在50μM浓度下,化合物1和2具有一定的一氧化氮(NO)生成抑制活性,抑制率分别为47.59±3.18%和22.68±2.84%。对化合物1和2进行抗肿瘤细胞毒活性筛选,在40μM浓度下,化合物1对白血病HL-604和乳腺癌MCF-7的体外肿瘤生长有一定抑制活性,抑制率分别为38.20%,49.02%;化合物2对乳腺癌MCF-7较弱的抑制活性(抑制率33.20%)。抗凝血实验发现受试样品化合物1对活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)有一定的延长作用,时间为32.1±0.17 s。实验表明,基于一株多次级代谢产物策略可以很好的应用于发现新颖化合物。本实验主要通过改变培养基的成分,从而改变了菌株的次级代谢产物,为药物的发现提供物质基础。