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TNF超家族在细胞增殖、分化、死亡中起着十分重要的作用。其主要成员TNFa,TNFb(LTa),LTb,TRAIL,FAS配体等,在免疫调节及免疫应答中的作用已被广泛认识。增殖诱导配体APRIL和B淋巴细胞刺激因子BAFF(又名:Blys)是TNF配体超家族新近发现的两个关系密切的成员。通过与其受体BAFF-R,BCMA,TACI相互作用,在B淋巴细胞生长、分化和发育,抗体类型转换、生发中心维持、T细胞共刺激等方面发挥着重要的作用。
BAFF/APRIL系统(BAFF,APRIL和它们的受体)在自身免疫性疾病和B淋巴细胞系恶性肿瘤的发生和维持过程中发挥重要的作用。临床研究发现在系统性红斑狼疮,类风湿性关节炎,多发性硬化以及一些恶性肿瘤中,BAFF和APRIL表达水平升高。BAFF/APRIL系统成为研究治疗自身免疫性疾病药物的新的靶点。
我们构建pET41a-APRIL原核表达载体,在传统培养基中加入葡萄糖,乳糖,形成APRIL自动诱导表达系统,在大肠杆菌中成功实现了高密度诱导GST—APRIL的可溶性表达,与传统的IPTG诱导相比显著提高外源蛋白的可溶性。通过原位酶切,成功纯化得到成熟的r-APRIL,产率约为20mg/L,纯度大于80％。活性检测显示,APRIL具备受体BCMA结合能力,并可以促进RajiB淋巴细胞瘤的增殖。为后续研究APRIL功能和其阻断剂打下良好的基础。
通过计算机模拟构建BCMA—FC蛋白质三维结构模型,通过分子对接预测BCMA—Fc具备APRIL,结合能力。构建pPIC9K酵母表达载体,电转化毕赤酵母后,通过营养缺陷和G418抗性两步筛选,获得高表达转化子,使用毕赤酵母表达BCMA—Fc融合蛋白,经过超滤浓缩,分子筛和rProteinA亲和层析,得到BCMA—Fc融合蛋白,产率为10mg/L,纯度大于80％,活性检测证实BCMA-Fc具备配体APRIL结合能力,同分子对接的结果一致。BCMA—Fc在体内作为欺骗受体可以抑制APRIL的生物活性,有望成为治疗自身免疫性疾病的特效药物。