土壤来源黑曲霉的次生代谢产物及其生物活性研究

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目的从土壤中分离筛选出次生代谢产物丰富的真菌菌种,通过形态、生理生化及分子生物学鉴定菌株种类,优化固体发酵条件,研究其次生代谢产物的结构与生理活性,为生物利用和新型先导药物开发奠定基础。方法通过倍数稀释法和平板划线法分离得到4种菌株,用只含大米的培养基对所得4种真菌进行固体发酵。利用薄层色谱对发酵产物浓缩粗提液进行初步分析,通过对比各菌种成分及含量,确定大批量发酵黑曲霉菌种并对其次生代谢产物成分进行研究。硅胶柱色谱法对黑曲霉固体发酵物的提取物进行初步分离,硅胶柱色谱法和葡聚糖凝胶柱色谱法进一步分离纯化,单体成分采用NMR进行结构鉴定。进一步对单体化合物进行生物活性测定,滤纸片法检测抑菌活性,单体化合物对酪氨酸酶的抑制或促进作用,测定化合物的体外应用活性,确定体外最适反应体系。结果硅胶柱色谱法结合LH-20凝胶柱色谱法从真菌黑曲霉中成功分离获得15种单体化合物X5-1-X5-15,鉴定为萘并吡喃酮类化合物及甾体类化合物。化合物活性测定中,滤纸片法抑菌试验无明显效果,对酪氨酸酶的作用方面部分单体化合物表现出明显的抑制作用。结论从黑曲霉中分离得到15种化合物,对14种化合物进行了对酪氨酸酶的活性测定试验,其中有6种化合物对酪氨酸酶有抑制作用,8种无明显作用。(1)单体化合物X5-1、X5-2、X5-5、X5-7、X5-8、X5-11、X5-13、X5-15对酪氨酸酶未表现出明显的作用。(2)单体化合物X5-3、X5-6、X5-10、X5-14对酪氨酸酶有明显的抑制作用,且X5-6、X5-10、X5-14对酪氨酸酶的抑制作用随浓度的升高而增强,X5-3对酪氨酸酶的抑制作用随着浓度的升高先增强后减弱。(3)单体化合物X5-3、X5-6、X5-10、X5-14对酪氨酸酶的抑制作用与阳性对照L-抗坏血酸(Vc)对酪氨酸酶的抑制作用相比,X5-10、X5-14对酪氨酸酶的抑制作用更加显著,但X5-6对酪氨酸酶的抑制效果次之。(4)单体化合物X5-4、X5-9对酪氨酸酶有抑制作用,与其他单体化合物相比抑制率较低,尤其是化合物X5-9。(5)单体化合物与酪氨酸酶作用的最适反应体系为:温度为25℃、pH=6.5,与说明书条件一致。(6)萘并吡喃酮类化合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及酵母菌的滤纸片试验法显示:除抗生素有相应的抑菌圈外,其他单体化合物均未表现出明显的抑制或促进作用。
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