柑橘的采后病害是引起柑橘腐烂的主要原因,常会导致巨大的经济损失,化学杀菌剂是控制柑橘采后病害的主要手段,但长期大量使用化学杀菌剂会对人体健康及环境造成危害,同时也导致柑橘致病菌产生抗药性,从而降低防治效果因此,迫切需要生产一些新的、高效无毒的生物保鲜剂,以逐步取代化学杀菌剂在柑橘上的使用。目前,生防菌多采用液体深层发酵技术,对设备要求高,生产工艺复杂,成本高;而固体发酵采用的原料一般是廉价的农副产品,设备也较液体发酵简单。发酵产品经简单处理即可得到固体菌剂,生产成本低于液体发酵。本试验对柠檬形克勒克酵母菌34-9及其诱变菌株γ-60-11固体发酵培养基配方和发酵条件进行了研究,筛选出适合柠檬形克勒克酵母菌34-9及其诱变菌株γ-60-11固体发酵生产的培养基配方,并对培养基配方进行优化,明确了其发酵工艺条件。为研制有效的生物防治菌剂提供科学依据。主要结果如下:1.研究了菌种特性,确定了最佳种子液浓度以及培养时问:分析了柠檬型克勒克酵母的主要组成成分。研究了34-9和γ-60-11在豆芽汁液体培养基上的生长动态,确定了种子液最佳培养时间,34-9为14h,γ-60-11为16h,种子液浓度均为5×10⁸个/mL。2.筛选出固体发酵的最佳培养基配方:在摇瓶固体发酵基础上,34-9固体培养基配方为麸皮:玉米粉:豆粕=1:4:1,葡萄糖30g/kg,（NH₄）₂SO₄9g/kg,KH₂PO₄9g/kg,蛋白胨5g/kg;MgSO₄·7H_O 2.4 g/kg,ZnSO₄·7H₂O 0.4 g/kg,CaCl₂·2H₂O 0.12 g/kg,生物素0.1mg/kg,泛酸钙30mg/kg,核黄素6 mg/kg。γ-60-11固体发酵的培养基配方为麸皮:玉米粉:豆粕=1:3:2;葡萄糖30 g/kg,（NH₄）2SO₄ 9g/kg,NaH₂PO₄ 9g/kg,蛋白胨10g/kg;MgSO₄·7H₂O 2.4 g/kg,ZnSO₄·7H₂O 0.4 g/kg,MnSO₄·7H₂O 0.02g/kg,CaCl₂·2H₂O 0.12 g/kg,生物素0.1mg/kg,肌醇3 mg/kg,硫胺素6 mg/kg,核黄素0.6mg/kg。3.获得了适宜的摇瓶固体发酵条件:对不同温度、不同发酵时间、不同接种量、不同料水比分别进行了试验,优化了发酵条件。34-9发酵温度为30℃,发酵时间32h,接种量15%,料水比1:1;γ-60-11发酵温度为28℃、发酵时间28h,接种量15%,料水比1:1;研究还表明在一定范圈内,随着接种量的增加,34-9和γ-60-11的生物量明显的提高。4.优化了发酵生产工艺:在发酵罐水平上,优化选择了34-9和γ-60-11的发酵生产工艺。搅拌速度8r/min,正转60s,反转60s,间隔3s;通气流量前12h为1m³/h,12h-36h为1.5m³/h,最后12h为1m³/h。34—9生物量达到4.16×10⁹CFU/g,γ-60-11达到3.75×10⁹CFU/g。