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第一章COPD患者肺血管内皮细胞凋亡和NF-κB的表达情况目的：观察慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肺血管内皮细胞凋亡、核因子κB(NF-κB)表达变化情况。方法：收集湘雅二医院胸外科2008年6月至2008年10月因肺癌、肺大疱入院行肺叶切除术的患者19例,根据COPD诊断标准和WHO吸烟调查方法标准,将其分为三组：A组：非吸烟非COPD者(6例)；B组：吸烟非COPD者(6例)；C组：吸烟并COPD患者(稳定期,7例)。利用HE染色评估肺部病理改变,采用缺口末端标记法检测肺血管内皮细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测NF-κB p65蛋白在肺血管内皮细胞的表达。结果：A、B、C三组肺血管内皮细胞凋亡率依次增高,分别为(4.84±0.45)%、(8.80±0.63)%、(11.87±0.79)%,任意两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。A组、B组、C组患者肺血管内皮细胞NF-κB p65表达率分别为(3.72±0.33)%、(15.92±1.13)%、(37.23±4.75)%,三组间依次增高,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：1.吸烟并COPD患者及吸烟非COPD者肺血管内皮细胞凋亡增加。2.吸烟并COPD患者及吸烟非COPD患者肺血管内皮细胞NF-κB表达增加。3.吸烟可能与肺血管内皮细胞凋亡,NF-κB表达增加有关。第二章COPD小鼠肺血管内皮细胞凋亡和NF-κB表达情况目的：观察COPD小鼠模型肺血管内皮细胞凋亡、核因子κB(NF-κB)表达变化情况。方法：16只C57BL／6J雄性小鼠随机分为对照组(8只)和COPD组(8只),采用烟雾暴露法建立COPD模型,对肺组织切片以HE染色评估肺部病理改变,采用缺口末端标记法定量肺血管内皮细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测NF-κB蛋白在肺血管内皮细胞的表达情况。结果：COPD模型小鼠肺血管内皮细胞凋亡率为(15.91±1.15)%,较对照组[(3.39±0.64)%]增高,两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。COPD模型小鼠肺血管内皮细胞NF-κB p65表达率为(35.30±4.20)%,较对照组[(6.37±0.54)%]增高,两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：1.吸烟COPD模型组小鼠肺血管内皮细胞凋亡增加。2.吸烟COPD模型组小鼠肺血管内皮细胞NF-κB表达增加。第三章NF-κB在CSE诱导的内皮细胞凋亡中的作用目的：研究NF-κB在香烟提取物(cigarette smoking extract,CSE)诱导的内皮细胞凋亡中的作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为以下三组,分别给予不同处理：1.不同浓度的CSE(0%、2.5%、5%、10%、20%)干预HUVEC12h；2.5%CSE干预HUVEC各0h、0.5h、2h、4h、8h、12h；3.用100μmol／L NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预处理HUVEC0.5h后,以5% CSE干预该细胞各1h、2h。以上各组采用免疫细胞化学法检测NF-κB p65核转位情况,用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测内皮细胞凋亡率。结果：1.①CSE浓度低于5%时,随CSE浓度的增加,NF-κB p65核转位率逐渐增加,5%CSE干预组核转位率最高,为(18.13±1.37)%,当CSE浓度超过5%时,NF-κB p65核转位率逐渐下降,且与5% CSE干预组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②随CSE浓度的增加,HUVECs的凋亡率逐渐增加,10%CSE组凋亡率最高,为(45.19±4.91)%,与其余干预组比较有统计学差异(P<0.05)。2.①5%CSE干预HUVECO.5h时NF-κB p65核转位率最高,为(93.80±3.12)%,和其他组比较有统计学差异(P<0.01),随干预时间增加,核转位率迅速下降。②5%CSE干预HUVEC2h以下,随干预时间的延长,HUVEC的凋亡率逐渐增加,但无统计学意义。5%CSE干预HUVEC超过2h后,凋亡率明显增加,且与2h组[(7.45±1.06)%]比较有统计学差异(P<0.05)。3.①PDTC预处理细胞后,5%CSE诱导1h及2h后的NF-κB p65核转位率明显下降,分别为(5.10±0.55)%、(4.51±0.85)%,与无预处理组[(31.93±2.94)%]、[(25.32±3.54)%]比较有统计学意义(P<0.05)。②以PDTC预处理HUVECs后,5%CSE诱导的细胞凋亡率明显增高,1h与2h组凋亡率分别为(11.20±1.11)%、(38.83±3.43)%,与未预处理组[(6.53±0.80)%]、[(28.87±3.53)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.CSE可诱导内皮细胞凋亡,且存在浓度依赖性和时间依赖性。2.CSE可于半小时激活内皮细胞NF-κB,发生核转位,但随时间增加核移位阳性率逐渐降低。3.CSE诱导的NF-κB激活可能对内皮细胞的凋亡有保护作用。