【摘 要】
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第一部分女性腹膜透析患者腹膜透析废弃液中ERα与腹膜纤维化的关系目的:探讨女性腹膜透析患者腹膜透析废弃液中雌激素受体α（Estrogen Receptor α,ERα）与腹膜纤维化指标的关系,评价ERα与腹膜纤维化的相关性。方法:收集60例2016年5月至2017年5月期间在我院肾内科病房接受腹膜透析质量评估的女性维持性腹膜透析患者的住院资料,包括年龄、原发病、透析方式、透龄、合并症、血压情况、营
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第一部分女性腹膜透析患者腹膜透析废弃液中ERα与腹膜纤维化的关系目的:探讨女性腹膜透析患者腹膜透析废弃液中雌激素受体α（Estrogen Receptor α,ERα）与腹膜纤维化指标的关系,评价ERα与腹膜纤维化的相关性。方法:收集60例2016年5月至2017年5月期间在我院肾内科病房接受腹膜透析质量评估的女性维持性腹膜透析患者的住院资料,包括年龄、原发病、透析方式、透龄、合并症、血压情况、营养状况等。所有患者加入本研究的前一天使用2.5%葡萄糖腹膜透析液留腹过夜,次日清晨留取腹膜透析废弃液10ml待测。根据患者是否绝经分为绝经组38例、非绝经组22例。采用ELISA方法测定腹膜透析废弃液中ERα及纤维化相关指标转化生长因子β1（Transforming Growth Factor-betal,TGF-β1）、Ⅰ 型胶原蛋白（Collagen Ⅰ,COL-Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（Collagen Ⅲ,COL-Ⅲ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth Muscle Actin,α-SMA）、纤维连接蛋白（FN,Fibronectin）、钙黏蛋白E（E-Cadherin）的表达量。结果:（1）绝经女性腹透废弃液中ERα表达量较非绝经女性增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（2）绝经女性腹透废弃液中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的表达量较非绝经组增多,差异具有统计学义（P＜0.05）,但两组TGF-βl、α-SMA、FN及E-Cadherin表达量无明显差异。（3）绝经期女性腹透废弃液中ERα表达量与 TGF-β1、COL-I、COL-Ⅲ呈明显正相关,与 E-Cadherin,FN,α-SMA无相关性;非绝经期女性腹透废弃液中ERα表达量与TGF-β1、COL-I、COL-Ⅲ亦呈明显正相关,与E-Cadherin,FN,α-SMA无相关性。结论:女性腹膜透析患者腹膜透析废弃液中,ERα与部分纤维化指标存在一定相关性,提示ERα可能参与腹膜纤维化的发生发展过程。第二部分ER α/TGF-β1/Smad信号通路在C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞转分化中的意义目的:通过高糖诱导C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞建立腹膜间皮细胞转分化模型,通过检测ERα/TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白ERα、TGF-β1、Smad2/3及腹膜间皮细胞转分化相关标志蛋白E-cadherin、Vimentin的表达,探讨ERα/TGF-β 1/Smad信号通路在C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞EMT过程中的意义。方法:采用胰蛋白酶消化法分离培养C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞,常规传代、鉴定,取第二代腹膜间皮细胞用于实验。实验分组:（1）空白对照组（Control）:只加1%胎牛血清的DMEM/F12培养基;（2）高糖组（HG）:4.25%高糖腹透液共培养48h;（3）ERα激动组（PPT）:4.25%高糖腹透液与ERα激动剂共培养48h;（4）ERα抑制剂组（TAM）:4.25%高糖腹透液与ERα抑制剂TAM共培养48h;（5）ERα激动剂+Smad3抑制剂组（PPT+SIS3）:4.25%高糖腹透液与ERα激动剂及SIS共作用48h。采用免疫荧光组化及Western blot检测C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞ERα、TGF-β1、Smad2/3及EMT相关标志蛋白的表达水平。结果:（1）间接细胞免疫荧光及Western blot检测显示高糖作用下C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞ERα蛋白表达明显增加（P＜0.01）;（2）经不同的药物干预后,间接细胞免疫荧光及Western blot检测显示ERα/TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白 E-cadherin 的表达依次以 Control、TAM、PPT+SIS3、HG、PPT 减弱;而 Vimentin 的表达依次以 Control、TAM、PPT+SIS3、HG、PPT 增强;TGF-β1的表达依次以Control、TAM、PPT+SIS3、HG、PPT增强;且Smad2/3蛋白的表达也依次以Control、TAM、PPT+SIS3、HG、PPT增强。经比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。结论:高糖能诱导C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞发生EMT,导致ERα/TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达异常ERα抑制剂TAM可能通过下调TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白的表达而实现抑制C57BL/6小鼠腹膜间皮细胞EMT进程。
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