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目的:观察斑蝥素酸镁对肝癌细胞SMMC-7721丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路以及周期相关蛋白的影响,并与同为蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)抑制剂的冈田酸(Okadaic acid,OA)进行比较,初步探讨斑蝥素酸镁的抗肝癌机制。方法:1、采用磺酰罗丹明染色法(Sulforhodamine B,SRB法)检测不同浓度斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用;2、采用SRB法检测不同低浓度OA对人肝癌细胞SMMC-7721的促增殖作用;应用免疫荧光染色法检测不同低浓度OA对人肝癌细胞SMMC-7721增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响;3、利用PP2A活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁、冈田酸对PP2A活性的影响;4、RT-q PCR检测斑蝥素酸镁、冈田酸对人肝癌细胞SMMC-7721MAPK家族ERK1、ERK2、p38 MAPK、JNK1、JNK2基因的m RNA表达水平的影响;5、Western blot检测斑蝥素酸镁、冈田酸对人肝癌细胞SMMC-7721MAPK家族ERK1/2、p38 MAPK、JNK成员的蛋白表达以及蛋白磷酸化表达水平的影响;6、Western blot检测斑蝥素酸镁、冈田酸对人肝癌细胞SMMC-7721周期蛋白Cdc25C、Cdc2表达以及Cdc2磷酸化表达水平的影响。结果:1、斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721有明显的抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而升高,呈剂量效应关系,其半数抑制浓度(IC50)为2.266?mol/L;2、(1)浓度为5.9 nmol/L的OA对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖仍有抑制作用,随着OA浓度逐渐下降则出现促肝癌细胞增殖,但更低浓度组促增殖作用逐渐降低,浓度达到0.01475nmol/L时无促增殖作用;(2)PCNA表达变化趋势与SRB结果一致;3、0.283?mol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用(P>0.05),当浓度为0.567?mol/L时能显著抑制PP2A活性(P<0.01),且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用(P<0.01)。4、与空白对照组比较,0.283?mol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2基因m RNA表达量无明显变化(P>0.05),当浓度为0.567?mol/L时ERK1、ERK2基因m RNA表达量显著下降(P<0.01),且随着药物浓度的增加下降更加明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2基因m RNA表达量却显著升高(P<0.01);不同浓度斑蝥素酸镁和OA组p38 MAPK、JNK1、JNK2基因m RNA表达量均显著升高(P<0.01);5、ERK1/2、p38 MAPK、JNK总蛋白表达量的变化趋势与m RNA水平一致;与空白对照组比较,0.283?mol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化(P>0.05),当浓度为0.567?mol/L时ERK1/2磷酸化水平显著下调(P<0.01),其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调(P<0.01);不同浓度斑蝥素酸镁和OA组p38 MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调(P<0.01);6、与空白对照组比较,0.283?mol/L斑蝥素酸镁组周期蛋白Cdc25C、Cdc2表达量及Cdc2磷酸化水平没有明显变化(P>0.05),当浓度为0.567?mol/L时Cdc25C、Cdc2表达量显著下降(P<0.01),随着药物浓度的增加下降更加明显;而Cdc2磷酸化水平却显著上调(P<0.01),且随浓度的增加依次递增;OA组Cdc25C、Cdc2表达量及Cdc2磷酸化水平变化与斑蝥素酸镁相反。结论:1、斑蝥素酸镁能明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,而低浓度OA却能促进肝癌细胞增殖;2、与低浓度冈田酸促癌作用不同的是,斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路,调控Cdc25C表达下调,使Cdc2抑制位点磷酸化后活性下降,导致细胞发生G2/M期阻滞,最终诱导细胞凋亡。