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目的:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率依然很高。在中国,大约三分之二的胃癌患者是到晚期才被诊断出来。由于它对化学治疗和放射治疗等一些常规的肿瘤治疗方法不敏感,所以目前仍主要通过手术方法来治疗胃癌,但是肿瘤细胞具有迁移和侵袭的特点,肿瘤的侵袭转移是影响预后的主要原因,它不但是术后复发之根本,甚至使部分患者失去了手术的可能,因此肿瘤的侵袭转移是其难以治愈的关键,但胃癌发生转移的具体机制仍然不清楚。酸敏感离子通道(Acid-sensing ion channels,ASICs)是细胞外由H+调控的离子通道。研究表明在神经细胞中有ASICs的表达,也有研究表明在神经胶质瘤细胞和唾液腺癌细胞中也有ASICs的表达,神经胶质瘤的恶化程度与ASICs的表达呈正比,并且ASICs对肿瘤发生发展、侵袭转移产生影响,运用ASICs的阻断剂阿米洛利抑制了神经胶质瘤的迁移。儿茶素(Catechin,Cat)为一种纯植物提取物。研究表明,儿茶素具有较明显的抑制肿瘤发生和抗突变作用,可以通过抑制肿瘤血管生成来抑制肿瘤细胞的侵袭转移,也可以通过下调Akt信号和钙黏素的表达抑制癌细胞的侵袭转移。令我们感兴趣的是胃癌细胞中有没有ASICs的表达,ASICs对胃癌细胞迁移和侵袭的影响,以及儿茶素会不会通过ASICs影响胃癌细胞的迁移和侵袭。鉴于此,本研究运用细胞免疫化学实验检测ASICs在胃癌中的表达,运用侵袭实验和划痕实验等方法初步探讨ASICs在胃癌细胞迁移和侵袭中的作用,运用全细胞膜片钳实验检测ASICs电流;通过加药前后分析儿茶素是否作用于新的靶点对胃癌迁移和侵袭产生影响。方法:1培养胃癌SGC7901和MGC803细胞。2设置空白对照组,儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l处理组,MTT比色法检测各组细胞的吸光度。探讨儿茶素对胃癌细胞SGC7901和MGC803生存率的影响。3设置空白对照组,儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组,采用免疫细胞化学技术,检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组中ASIC1的表达情况。4设置空白对照组,儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组,细胞划痕实验检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组的迁移能力。5设置空白对照组,儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l,阿米洛利50μmol/l、100μmol/l处理组,细胞侵袭实验检测胃癌细胞MGC803和SGC7901各组的侵袭能力。6设置空白对照组、儿茶素400μmol/l、阿米洛利100μmol/l处理组,采用膜片钳实验技术,观察胃癌细胞MGC803和SGC7901中ASICs开放情况和电流的大小。结果:1 MTT方法检测不同浓度的儿茶素对胃癌细胞SGC7901和MGC803存活率的影响:设置空白对照组,儿茶素50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l药物处理组,计算细胞存活率。在SGC7901细胞中,细胞存活率的结果分别为90.90±1.275、77.78±3.298、64.78±3.309、26.06±6.440(%);在MGC803细胞中,结果分别为90.12±3.241、75.58±3.971、58.82±3.720、21.54±2.414(%)。儿茶素可以降低胃癌细胞MGC803和SGC7901的存活率,但当儿茶素达到400μmol/l时,细胞的存活率降至50%以下。2免疫细胞化学实验检测胃癌细胞MGC803和SGC7901中ASIC1表达的阳性率:在胃癌细胞SGC7901和MGC803中均存在ASIC1之表达,并且胃癌细胞SGC7901中ASIC1的阳性表达率高于MGC803中ASIC1的阳性表达率(P<0.05);与空白对照组相比,50μmol/l阿米洛利组降低了胃癌细胞SGC7901和MGC803两种细胞中ASIC1的阳性表达率(P<0.05),100μmol/l阿米洛利可以显著地降低胃癌细胞SGC7901和MGC803两种细胞中ASIC1的阳性表达率(P<0.01)。与空白对照组相比,50μmol/l、100μmol/l儿茶素可降低胃癌细胞SGC7901和MGC803中ASIC1的阳性表达率(P<0.05),200μmol/l儿茶素可显著降低胃癌细胞SGC7901和MGC803中的ASIC1的阳性表达率(P<0.01),并且儿茶素对ASIC1表达的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P<0.05)。3细胞划痕实验检测细胞的迁移能力:胃癌细胞MGC803和SGC7901均具有迁移能力,而且SGC7901细胞的迁移能力强于MGC803细胞的迁移能力(P<0.05)。阿米洛利使胃癌细胞MGC803和SGC7901的迁移能力均减弱,与空白对照组相比,50μmol/l阿米洛利可以抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901的迁移能力(P<0.05),100μmol/l阿米洛利则可以显著地使胃癌细胞MGC803和SGC7901的迁移能力减弱(P<0.01),提示抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901中ASIC的表达将会抑制两种胃癌细胞的迁移能力。儿茶素使胃癌细胞MGC803和SGC7901的转移能力均下降,与空白对照组相比,50μmol/l、100μmol/l儿茶素可抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901之迁移能力(P<0.05),200μmol/l儿茶素可显著地使胃癌细胞MGC803和SGC7901的迁移能力减弱(P<0.01),并且儿茶素对两种胃癌细胞迁移能力的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P<0.05)。4 Transwell实验检测细胞的侵袭能力:胃癌细胞MGC803的侵袭能力弱于SGC7901(P<0.05)。阿米洛利使两种胃癌细胞之侵袭能力均减弱,与空白对照组相比,50μmol/l阿米洛利抑制了胃癌细胞MGC803和SGC7901的侵袭能力(P<0.05),100μmol/l阿米洛利可以显著地使胃癌细胞MGC803和SGC7901之侵袭能力减弱(P<0.01),提示抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901中ASIC的表达将会使其侵袭能力减弱。儿茶素可使胃癌细胞MGC803和SGC7901的侵袭能力均减弱,与空白对照组相比,50μmol/l、100μmol/l儿茶素对胃癌细胞MGC803和SGC7901之侵袭能力有抑制作用(P<0.05),200μmol/l浓度儿茶素则可以显著地抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901的侵袭能力(P<0.01),并且儿茶素对两种胃癌细胞侵袭能力的抑制作用小于阿米洛利的抑制作用(P<0.05)。5全细胞膜片钳技术检测细胞ASICs电流:在MGC803和SGC7901两种胃癌细胞系中存在大小不等之ASICs电流,MGC803胃癌细胞的ASICs电流小于SGC7901胃癌细胞的ASICs电流(P<0.05);与空白对照组相比,加入ASICs阻断剂100μmol/l阿米洛利后,两种细胞中检测出的电流均被抑制(P<0.05)。400μmol/l儿茶素也可以抑制MGC803和SGC7901两种胃癌细胞的ASICs电流(P<0.05),但是儿茶素抑制ASICs电流的作用要弱于阿米洛利(P<0.05)。结论:1.ASICs可能参与了胃癌细胞的迁移和侵袭。2.儿茶素抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,与其作用于ASICs有关。