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目的:血管性痴呆(Vascular Dementia ,VD)是我国疾病的第三大致死因素,近几年来VD越来越受关注。脑缺血后神经递质减少,脑细胞开始凋亡。凋亡的重要调节者是一个分子家族:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,称为caspases。越来越多的证据表明:神经递质减少及脑细胞凋亡主要发生在半暗带区域,而缺血中心区快速的能量丢失引起急性坏死,半暗带区被认为是脑缺血的治疗目标。因此,深入探讨VD的病理机制,开发和研制防治VD的有效药物具有重要意义。根据中医学对VD的传统认识和现代研究成果,导师以化浊解毒、活血化瘀法治疗VD,临床取得良好疗效。本实验采用双侧颈总动脉结扎的方法制备小鼠VD模型,观察此方药对小鼠行为学、海马组织病理形态学、免疫组化Caspase-3的表达、血清中NE、DA含量,探讨其治疗VD的疗效及作用机制。方法:实验采用双侧颈总动脉结扎的方法制备血管性痴呆小鼠模型。健康雄性昆明小鼠45只,随机分为假手术组、模型组、化浊解毒、活血化瘀高剂量组(以下简称“高剂量组”)、化浊解毒、活血化瘀低剂量组(以下简称“低剂量组”)、尼莫地平对照组(以下简称“尼莫地平组”)5组,每组9只。假手术组小鼠只分离颈总动脉,穿线但不结扎,不断尾,不放血。其余各组结扎双侧颈总动脉,制备反复脑缺血再灌注VD模型。术后第2天开始治疗。假手术组和模型组灌服生理盐水,高剂量组和低剂量组灌服化浊解毒、活血化瘀液,尼莫地平组灌服尼莫地平液。于术后14天进行行为学测试(跳台试验、电迷宫实验)。行为学测试结束后断头处死小鼠,取海马固定后切片,HE染色,光镜下观察海马组织的形态变化。观察海马组织Caspase-3的表达。取血清,离心后取上清液,采用ELISA法进行检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的变化。结果:1化浊解毒、活血化瘀法对VD小鼠行为学实验的影响1.1跳台成绩术后各阶段模型组小鼠的反应时间延长,潜伏期缩短,错误次数增加,与假手术组比较,有统计学意义(P<0.01),各给药组与模型组比较,反应时间缩短,潜伏期延长,错误次数减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。1.2电迷宫术后14天,模型组小鼠错误次数增多,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。各给药组与模型组比较,小鼠错误次数减少具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且高剂量组优于低剂量组和尼莫地平组,低剂量组和尼莫地平组之间比较无显著差异(P>0.05)。2化浊解毒、活血化瘀法对VD小鼠病理形态学的影响光镜下观察各组小鼠海马组织的病理形态学变化,模型组海马组织呈缺血性病理改变。锥体细胞层次减少,排列稀疏,明显脱失,细胞变小,结构不清。假手术组海马区锥体细胞排列整齐,细胞核大而圆,核仁清楚。相对而言,各用药组小鼠病变比模型组均有所改善。3 Caspase-3免疫组化结果化浊解毒、活血化瘀汤高剂量组和假手术组可见少量的Caspase-3阳性细胞,模型组、尼莫地平组在各时间点均见大量Caspase-3阳性细胞。Caspase-3阳性细胞胞膜完整,胞体呈椭圆形或梭形,胞浆呈棕黄色染色。模型组、尼莫地平组阳性细胞数明显高于给药组、假手术组(P<0.05),差异有显著性意义。4化浊解毒、活血化瘀法对VD小鼠血清中NE、DA含量的影响模型组与假手术组比较,模型组小鼠血清中NE、DA含量明显低于假手术组(P<0.01或P<0.05);各用药组与模型组比较,均能明显升高小鼠血清中NE、DA的含量(P<0.01或P<0.05);各用药组间的比较:高剂量组的NE、DA含量明显高于尼莫地平组,有统计学意义(P<0.05);而低剂量组与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)。结论1引起VD的重要原因是脑缺血,其主要症状是造成学习记忆能力下降。化浊解毒、活血化瘀法可提高VD小鼠跳台与电迷宫实验的成绩。2海马是脑组织对缺氧缺血最敏感的部位之一,海马锥体细胞的受损是血管性痴呆的病理学基础,化浊解毒、活血化瘀法对VD小鼠有治疗作用,可减轻脑缺血再灌注造成的损害。3脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡扮演了重要角色,细胞凋亡涉及Caspase-3的激活。Caspase-3表达的升高早于细胞凋亡,直接参与神经细胞凋亡的执行过程。4化浊解毒、活血化瘀法可以提高VD小鼠血清中NE和DA的含量,减轻缺血再灌注损伤。