论文部分内容阅读
背景:子宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率位于女性肿瘤的第二位。全世界每年大约有20万妇女死于这种疾病。人类基因组图谱的绘制以及人类基因组研究的蓬勃兴起,为从源头上防治恶性肿瘤提供了新的途径。近期的大量研究表明,人类基因组中与细胞增殖分化相关癌基因的激活和抑癌基因的失活与恶性肿瘤的发生、发展密切相关,在此基础上出现了对恶性肿瘤进行基因治疗的理论和实践探索。寻找和确定有治疗意义的目的基因是实施肿瘤基因治疗的前提。基因转染是将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。其中,核酸包括DNA(质粒和线性双链DNA),反义寡核苷酸及RNAi(RNAinterference)。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究中。脂质体(liposome)在所有科研和已用于临床实验的细胞导入载体中具有重要位置,是近几年最有发展前景的非病毒载体,适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方便的转染方法之一。与病毒载体相比,脂质体介导法更简单、安全、具有较低的免疫原性、可以大量生产,而且不受所携带元件大小的限制等优点。干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因-19(gene associated withretinoid-interferon-induced mortality-19,GRIM-19)是一种新的细胞凋亡基因,通过多种机制来参与细胞凋亡。GRIM-19的正常表达可以维持细胞正常的生活周期,使细胞从衰老进入凋亡,低表达则使某些细胞不能正常地进入细胞凋亡周期,从而引发肿瘤的发生。GRIM-19还是线粒体中NADH脱氢酶1复合物的基本组成部分,在线粒体Ⅰ型呼吸过程中至关重要,参与细胞的供能、供氧、凋亡的启动。转录信号转导子与激活子3(signal transducersand activators of transcription 3,STAT3)是Src酪氨酸激酶家族成员之一,STAT3及其介导的信号转导通路参与调节细胞的增殖、凋亡与分化。并介导细胞的恶性转化。GRIM-19属STAT3特异性抑制蛋白,在多种肿瘤组织中表达缺失或下降。目的分析GRIM-19及其靶基因STAT3在子宫颈癌组织中的表达情况。探讨GRIM-19及其对下游基因STAT3的抑制作用和对人子宫颈癌HeLa细胞株生物学行为的影响,探讨GRIM-19及其靶基因产物在子宫颈癌发病中的作用,为临床治疗的应用提供理论和实验依据。方法①免疫组化检测正常子宫颈组织与子宫颈癌组织中GRIM-19的表达;②Western Blot、RT-PCR检测子宫颈癌组织中GRIM-19和STAT3的表达情况;③GRIM-19序列转染到人子宫颈癌HeLa细胞株中,建立稳定转染GRIM-19的HeLa细胞株;④通过RT-PCR和Western-Blot方法鉴定Hela/GRIM-19和Hela/control细胞株GRIM-19表达和对STAT3抑制效果。⑤MTT法检测Hela/GRIM-19和Hela/control细胞株经不同治疗后的细胞增殖能力,并绘制生长曲线;⑥Hela/GRIM-19和Hela/control细胞株裸鼠体内成瘤实验,绘制肿瘤生长曲线。结果①免疫组化结果显示GRIM-19蛋白在正常人子宫颈组织中表达明显高于子宫颈癌组织。②Western blot检测子宫颈鳞状细胞癌组织和正常人子宫颈组织GRIM-19的表达,提示在蛋白水平GRIM-19的表达降低,而STAT3的表达相应升高;③通过RT-PCR检测子宫颈癌的mRNA水平,提示GRIM-19表达明显降低,STAT3表达增强;④建立了稳定表达GRIM-19基因的Hela/GRIM-19和Hela/control细胞株。⑤MTT检测结果显示Hela/GRIM-19组细胞增殖较Hela/control明显下调(p＜0.05),⑥接种于裸鼠皮下的Hela/GRIM-19细胞的肿瘤生长明显慢于接种Hela/GRIM-19细胞的肿瘤生长速度,肿瘤体积前者亦明显小于后者。(p＜0.01)。结论稳定表达GRIM-19的HeLa细胞株中STAT3表达下降,子宫颈癌患者中GRIM-19表达水平的下调导致STAT3的持续高表达,激活了STAT3信号转导通路,促进细胞增殖、抑制细胞的凋亡。提高GRIM-19在细胞中的表达,抑制STAT3信号转导通路的激活,有望成为子宫颈癌基因治疗的新途径。