一株新城疫病毒强毒株的分离鉴定及致病性研究

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新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种急性、败血性传染病,该病可造成鸡的大量死亡,对养鸡业危害严重。加强对该病的诊断方法和致病性的研究对预防和控制鸡新城疫的发生,保护和促进养鸡业的健康发展具有重要意义。本研究内容包括两部分:一、新城疫病毒RT-PCR诊断方法的建立根据GenBank中新城疫F基因序列设计合成了1对引物扩增相对保守的550bp的目的片段,建立了新城疫病毒病的RT-PCR诊断方法。该方法能从新城疫病毒SD株扩增到550bp的特异性片段,而传染性法氏囊病毒、H9N2亚型流感病毒、鸡马利克病毒扩增结果为阴性,敏感性试验最低检出量的cDNA浓度为3pg/μL。表明所建立的RT-PCR方法特异性强、敏感性高。二、新城疫病毒致病性研究在本研究中从山东省的发病鸡群中分离了1株病毒,经HA、HI试验和病毒回归试验确定所分离的毒株为新城疫病毒,命名为SD株。按常规方法测得SD株的生物学毒力指标MDT、ICPI和IVPI分别为47.4h、1.975和2.85,鸡胚半数致死量LD50为10-9.6。通过RT-PCR扩增出了SD株的F基因,通过分析其融合蛋白氨基酸序列发现,SD属于基因Ⅶ型,其多肽裂解位点为112-RRQKRF-117。表明SD株为NDVⅦ型强毒株。新城疫SD株与近几年国内外分离的基因Ⅶ型同源性较高,在93.5%-98.3%;与近几年分离的鹅源鸭源同源性也较高在95.2%-96.5%之间;而与经典强毒株F48E9和Lasota株的核苷酸和氨基酸同源性分别为85.8%、91.3%和83.3%、88.4%。
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