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目的：1.研究Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone-marrbwmesenchymal stem cells，BMSCs)分裂增殖和细胞周期的影响。 2.研究Rho激酶抑制剂Y-27632联合表皮刺激因子(EGF)和碱性成纤缁细胞生长因子(bFGF)，能否促进大鼠BMSCs分化为神经元和神经胶质细胞。 方法：1.采用改良的贴壁细胞培养法：体外分离培养SD大鼠BMSCs，96孔板中培养，取生长状态良好的第二代BMSCs，调整细胞浓度为1×105/孔，随机分为实验组和对照组：实验组分别用2.5Bμmol/L、5.0μmmol/L、10.0μmmol/L、20.0μmmol/L浓度梯度的Y-27632与含10％FCS的DMEM/F12培养基共培养96h；对照组仅用含10％FCS的DMEM/F12培养基培养。四甲基偶氮唑蓝[MTT]法检测细胞的增殖，并绘制细胞生长曲线，明确Y-27632促进BMSCs增殖的最佳浓度；用流式细胞仪检测细胞生长周期的变化。 2.取纯化后的第三代大鼠BMSCs于6孔板中用含浓度为2％B27的Neurobasal无血清培养基培养72h后，随机分为：常规诱导组(EGF+bFGF)，Y-27632联合常规诱导组(Y-27632+EGF+bFGF)，连续培养48h。显微镜下观察细胞的生长情况，免疫荧光双标染色法分别检测诱导分化的BMSCs中神经元特异性稀醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达，并计算单位视野内NSE、GFAP阳性细胞数目；Western-blot检测NSE、GFAP表达水平。统计分析联合应用Y-27632对诱导大鼠BMSCs分化为神经元和神经胶质细胞的影响。 结果：1.Y-27632对BMSCs细胞增殖与生长的影响： (1)对增殖的影响大鼠BMSCs培养24h，各组细胞吸光度(OD)值均维持在较低水平，各浓度组之间差异无统计学意义(P>0.05)；细胞培养48h，各组细胞OD值明显上升，其中，10.0μmol/L组细胞吸光度值升高明显，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，而其他实验组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；培养至96h，实验组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)，且10.0μmol/L组与其他浓度组相比差异有统计学意义(P<0.05)。说明Y-27632可以促进大鼠BMSCs的增殖，其促增殖效应与作用浓度有关，其中10.0μmol/L促进BMSCs增殖效应优于20.0μmol/L和5.0μmol/L。 (2)对细胞周期的影响流式细胞术检测：对照组G0/G1期细胞比例为(80.640±5.516)％，S期细胞比例为(13.397±2.511)％；实验组G0/G1期细胞比例为(61.723±8.829)％，S期细胞比例为(29.380±7.630)％，实验组与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。 2.联合应用Y-27632促进大鼠BMSCs分化为神经元和胶质细胞两组BMSCs细胞诱导12h，倒置显微镜可见培养细胞胞体回缩，折光性增强，部分细胞出现神经元及神经胶质细胞样外观；诱导24h，荧光显微镜可见同一细胞中NSE、GFAP两种物质共表达。诱导48h，BMSCs向神经元及神经胶质细胞系分化，其中常规诱导组，单位视野内NSE阳性细胞数量数为(83.200±8.677)个，GFAP阳性细胞数量数为(96.30±8.486)个；Y-27632联合诱导组，NSE阳性细胞数量数为(109.20±8.430)个，GFAP阳性细胞数量数为(107.50±8.683)个；两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测结果显示；BMSCs诱导分化48h，诱导分化的细胞均表达NSE、GFAP两种蛋白，而Y-27632联合诱导组与常规诱导组相比，NSE、GFAP蛋白的表达均上调，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：本实验条件下， 1.Y-27632可以促进大鼠BMSCs的增殖，其最佳浓度为10.0μmol/L； 2.Y-27632可以促进大鼠BMSCs DNA的合成，从而促进细胞分裂和增殖； 3.Y-27632联合EGF和bFGF，可以促进大鼠BMSCs分化为神经元和神经胶质细胞。