【摘 要】
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目的:建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(Fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(X chromosome inactivation,XIST)甲基化的实验方法。方法:用亚硫酸氢
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目的:建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(Fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(X chromosome inactivation,XIST)甲基化的实验方法。方法:用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰。以修饰后的DNA为模板,用两对不同的引物:1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因(CGG)n重复序列区、FMR1和XIST基因的启动子区。PCR产物进一步克隆、测序。结果:以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物与预期目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物。测序结果表明,FMR1、XIST基因中CpG岛的非甲基化的碱基C转变为碱基U,而CpG岛中被甲基化的碱基C不改变。结论:成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的实验方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法。
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