金属硫蛋白（MT）是一类分子量较小、富含Cys的金属结合蛋白，广泛分布于生物界。近年来研究表明，金属硫蛋白不仅参与体内微量元素的储存、转运和代谢，还具有拮抗电离辐射，清除自由基以及重金属解毒等作用。而植物金属硫蛋白的发现相对较晚，研究表明，植物金属硫蛋白可以通过其大量的Cys残基螯合重金属并清除活性氧，使植物免受氧化损伤。它还参与了植物的发育、胚胎发生、抵抗逆境胁迫等多种生理过程，因此对植物的生长非常重要。　　 本研究旨在建立海州香薷金属硫蛋白的高效表达及纯化体系，制备其多克隆抗体。根据已克隆的海州香薷金属硫蛋白基因序列，设计并合成一对特异性PCR引物。以基因cDNA第一链为模板，通过PCR扩增获得MT基因，并进一步将之克隆在质粒载体pGEM-T easy上。用限制性内切核酸酶从该载体上切下目的基因，然后插入到表达载体pGEX-2T上获得重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21，IPTG进行诱导表达，得到分子量约为33kDa的GST-EhMT1融合蛋白。该融合蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。可溶性蛋白经GST亲和树脂纯化后得到高纯度的目的蛋白。以融合蛋白作为抗原免疫家兔制备得到多克隆抗体。本实验取得如下研究结果：　　 1.成功地将扩增得到的目的基因EhMT1与克隆载体pGEM-T easy连接并转化到宿主菌JM109中，构建了重组克隆载体pGEM-T-EhMT1。　　 2.构建了EhMT1的原核表达载体pGEX-2T-EhMT1。序列分析表明，目的基因按正确的阅读框架插入到表达载体GST序列中。筛选出阳性重组体，表达的蛋白产物经SDS-PAGE证明EhMT1基因在大肠杆菌中成功得到了表达，其分子量约为33kDa.　　 3.经过优化目的融合蛋白的表达条件后，得到了含量比较高的可溶性融合蛋白。该可溶性融合蛋白纯化后得到单一的目的融合蛋白条带。　　 4.以目的融合蛋白作为抗原免疫成年家兔，获得多克隆抗体。间接ELISA和Western blotting分析表明，我们获得了高滴定度且特异性良好的多克隆抗体。该多克隆抗体的获得为目的基因进一步的功能验证、植物转基因检测等研究提供了依据。