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目的 TTV是从一名输血后肝炎病人血清中分离出的一种新型DNA病毒。TTV感染在各种人群中普遍存在，可存在于无任何症状健康者，也可以是一些病因不明肝病及非甲一非庚型暴发性肝炎患者的病原体和在其他肝炎病毒感染基础上发生重叠感染。目前对TTV的致病性的研究存在争论，有些学者认为TTV不能致病，有些持相反意见。有学者认为TTV的致病性与其基因型或基因变异有关。因此研究TTV在各人群中的感染情况，尤其是TTV感染在HBV慢性感染的基础上重叠感染是否加重其病情，以初步探讨TTV的致病性及TTV是否影响HBV的复制，并探讨TTV的基因变异及其准种复杂性与其致病性的关系有重要意义。方法 (1)在ORF1区设计特异性引物建立巢式多聚酶链反应(PCR)，检测献血员、非甲-非庚型肝炎患者及HBV感染患者血清中TTV DNA，对PCR产物进行测序，并比较TTV DNA阳性患者与阴性患者之间的肝功能指标(ALT、TBIL)的差异。(2)TTV DNA阳性患者采用不对称PCR获得单链DNA，然后对其进行SSCP分析，并结合TTV DNA熔点曲线分析基因变异。(3)在ORF1区的高变区(HVR)设计特异性引物建立巢式多聚酶链反应(PCR)扩增TTV DNA。对慢性重型乙型肝炎患者与慢性乙型肝炎病毒携带者的PCR产物进行分子克隆，各挑10个阳性克隆测序，对其序列进行同源性比较，并尝试DNA熔点曲线分析TTV准种的复杂性的可行性。结果 (1)献血员、慢性乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者的TTV DNA阳性率分别为10％(4/40)、11％(7/64)、27％(39/140)、48％(76/160)，非甲—非庚型肝炎患者中度、重度、重型患者TTV DNA阳性率分别为33％(4/12)、43％(6/14)、60％(6/10)。非甲—非庚型肝炎患者的TTV DNA阳性率与献血员相比较差异有显著性意义(P＜0.01)，非甲—非 博士学位论文 中文摘要庚型肝炎患者中度、重度、重型之间（P＜0刀5人慢性乙型肝炎中度、重度和‘慢性重型乙型肝炎患者与慢性乙型肝炎病毒携带者及献血员相比其差异也有显著性意义（P＜0刀1人 同时在不同类型乙型肝炎患者（如慢性重度、重型乙型肝炎患者与慢性乙型肝炎中度）之间相比差异有显著性（P＜0刀5太 慢性重度、重型乙型肝炎患者之间差异也有显著性（P＜0刀5人慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者的ALT和 TBIL的平均值在 TTV DNA阳性病人组与 TTV DNA阴性病人组之间比较有显著性差异（P＜0．05人 TTV DNA阳性病人组明显高于TTV DNA阴性病人组。非甲一非庚型肝炎患者的ALT水平在TTVDNA阳性组与 TTV DNA阴性组差异有显著（P＜0．05人 hV DNA阳性病人组明显高于 TTV DNA阴性病人组，但 TBIL水平比较差异无显著性（P＞0．05人 TTV DNA阳性组与 TTV DNA阴性组中 HBV感染复制指标的阳性率相比较无明显差异（＞0刀5＼（2献血员、非甲一非庚型肝炎患者中度、重度、重型患者中SSCP电泳条带数分别为 1．25土0．50，2．50土0．58，3＊土0＊3，4．3土1．21；1甲一非庚型肝炎患者各临床分型之间SS＊P电泳条带数比较差异有显著性（尸＜o．05人乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎中度、重度和重型患者中，SSCP电泳条带数分别为 1＊0土0．55，3．25士1．06，3．36士1．36，4．59士1．83；慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者组中SSCP电泳条带数显著多于乙型肝炎病毒携带者与献血员（＊＜0刀5）慢性重型乙型肝炎患者中SS＊P电泳条带数显著多于慢性乙型肝炎患者（P＜0刀5人慢性重型肝炎及慢性乙型肝炎患者组中TTV熔点曲线乎均波峰数多于献血员和慢性乙型肝炎病毒携带者组（P＜0刀5人 慢性乙型肝炎患者各临床分型之间其差异 除重型与重度之外）均有显著性（P＜0对引。在非甲一非庚型肝炎患者中TTV熔点曲线平均波峰厂 值）数在各临床分型之间也存在差异，但重度与重型之间差异无显著性（P＞0刀5入（3）TTV DNA序列与日本株 TA278比较有 74％～95％的同源性。ASC IV 博士学位论文 中文摘要存在2种不同的TTV病毒株，其序列有7％的差异；C SHB中存在7种不同的 TT’V病毒株，彼此之间序列有 5％～24％不同。ASC的 ITV病毒株都为Qa亚型；CSm的 17V病毒株可分为＊a和 Glb两个亚型。由于基因核着酸序列的变化导致了编码的氨基酸序列的变化，ASC中的 TTV ORF蛋白氨基酸同源性为 77％和 78％，CSHB中有3株出现TTA终止密码突变，其它7株氨基酸变异频率在59％～76％，明显高于ASC，且出现氨基酸变异的位点CSHB也与ASC明显不同。结论 u）献血员、非甲一非庚型肝炎患者中存在TTV感染，乙型肝炎病毒感染患者重叠感染TTV较常见。＊）TTV的重叠感染可能是HBV感染病情加重因素之一，TTV重叠感染对可能不干扰HBV的复制。u）TTV可能有一定的致病性，其致病性可能与其基因变异有一定关系。u）TTV存在准种感染，不仅表现在核着酸水平的变异差异，而且在氨基酸水平也有较大变化，这种准种的复杂性可能在其致病机制中有一定作用。Glb亚型可能有一定的