日本血吸虫细胞凋亡的初步观察

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在我国,血吸虫病仍是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。已报道日本血吸虫可感染40余种哺乳动物,但日本血吸虫在不同宿主体内生长发育呈现明显差异。细胞凋亡是生物体内存在的一种正常的生理调控机制,在生物体的生长、发育及成熟过程发挥着重要作用。本实验室前期研究表明,不同宿主来源日本血吸虫10天童虫的细胞凋亡存在显著的差别,推测细胞凋亡可能是影响日本血吸虫虫体生长发育的重要因素之一。本研究以日本血吸虫非适宜性宿主大鼠和适应性宿主小鼠来源日本血吸虫虫体为研究对象,对不同时期虫体细胞凋亡现象进行了观察比较,取得以下初步结果:1、大鼠和小鼠来源日本血吸虫形态、发育及虫体细胞凋亡现象观察收集大鼠和小鼠来源14天、23天、32天和42天的日本血吸虫虫体,应用透射电子显微镜观察了不同宿主来源、不同发育时期虫体的细胞凋亡现象,在所有样品中都观察到部分虫体细胞呈现凋亡形态学变化,主要表现为细胞核仁裂解及核膜的肿胀,染色质凝集、边缘化呈新月形,细胞胞质浓缩、致密性增加,细胞固缩,细胞质空泡化等。动物感染实验还显示,血吸虫在大鼠和小鼠体内发育呈现明显差别,小鼠来源虫体的发育率为42.50%~75.00%平均值为55.75%,明显高于大鼠来源虫体的8.75%-30%,平均值为16.00%。相比于小鼠来源虫体,大鼠来源虫体的形态明显偏小(P<0.01)。大鼠肝脏上的白色虫卵结节/肉芽肿数明显要少于小鼠肝脏上的虫卵卵结节/肉芽肿数。2、TUNEL检测法观察不同宿主来源日本血吸虫不同时期虫体细胞凋亡现象通过TUNEL法对大鼠和小鼠来源日本血吸虫四个时期虫体凋亡现象进行观察,结果表明,在不同宿主来源日本血吸虫不同时期虫体中均可以观察到细胞凋亡现象,其中非适宜宿主大鼠来源虫体细胞凋亡比适宜宿主小鼠来源同期虫体呈现的凋亡现象更明显。3、应用流式细胞术检测日本血吸虫虫体凋亡细胞比例通过FITC-Annexin-V/PI双染色法标记凋亡细胞,应用流式细胞仪检测大鼠和小鼠来源日本血吸虫不同时期单细胞样品。结果分析表明,除23天小鼠来源虫体的早期细胞凋亡比例略高于大鼠来源虫体外,其余各个阶段大鼠来源虫体的早期和晚期虫体细胞凋亡比例都高于小鼠来源虫体。除14天虫体晚期凋亡细胞比例略高于23天虫体外,大鼠来源虫体的早期和晚期凋亡细胞比例随着虫龄的增长呈上升趋势。除23天虫体早期凋亡细胞比例高于14虫体,及42天晚期凋亡细胞比例略高于32天虫体外,小鼠来源虫体的早期和晚期凋亡细胞比例则随着虫龄的增长呈下降趋势。本文通过形态学、TUNEL法和流式细胞术三种方法均在大鼠和小鼠来源日本血吸虫不同时期虫体中观察到了细胞凋亡现象,同时观察到大鼠来源虫体细胞凋亡比小鼠来源虫体更为明显。结果提示凋亡可能是影响日本血吸虫在大鼠和小鼠体内发育、存活的重要因素之一,本研究为阐述日本血吸虫的生长发育机制及宿主和血吸虫相互作用机制积累了知识
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