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研究背景:新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是指围产期缺氧缺血所致的脑损伤,是导致新生儿死亡和发生后遗症的重要原因之一。而且存活者也有可能表现出精神运动发育障碍、睡眠-觉醒周期紊乱等生物节律异常,严重影响患儿的生存质量。在哺乳动物,生物节律的中央起搏点位于下丘脑视交叉上核(suprachiasmaticnuclei,SCN)。外周血淋巴细胞、松果体、肝、肾上腺、心脏等外周器官也存在一套钟振荡器,为外周生物钟,它与中枢振荡器分子组成相似;都是由一组昼夜节律基因及其编码的蛋白组成,是维持内源性生物钟运行的必要元件。在哺乳类生物节律的分子调节机制中Clock基因、Bmall基因及其表达产物CLOCK蛋白、BMAL1蛋白可直接影响下游基因的转录。因此CLOCK和BMAL1在生物体昼夜节律的调节、维持中具有重要的作用,处于核心地位。哺乳动物的松果体不仅表现内分泌输出效应,而且自身也起到外周昼夜节律振荡器的作用,被认为是昼夜节律的神经内分泌转换器。其分泌、释放的褪黑素以组织细胞间化学信使的形式,对SCN和外周生物节律进行昼夜动态调节。因此,SCN和松果体之间相互联系,共同形成核心生物钟,发挥昼夜节律整体振荡作用。目的:比较缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型组与对照组的新生大鼠松果体中CLOCK、BMAL1蛋白合成水平以及缺氧缺血性脑病新生儿与正常新生儿外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes cell,PBLC)中ClockmRNA、Bmall mRNA表达的变化,探讨钟基因表达异常在缺氧缺血性脑损伤导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法:本研究分成动物实验和临床研究两大部分。在动物实验部分,选用72只7日龄新生SD大鼠,随机分为二组(HIBD模型组与假手术组,每组36只)。HIBD模型按改良Levine法建立。用Western Blot方法测定缺氧缺血后0、2、12、24、36、48小时新生大鼠松果体中CLOCK、BMAL1蛋白合成水平。在临床部分,用半定量逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase PolymeraseChain Reaction,RT-PCR)测定18例HIE新生儿与18例正常新生儿PBLC中ClockmRNA、Bmall mRNA的表达水平,并比较各组之间的差异。结果:1.动物实验部分:①新生大鼠HIBD模型组松果体的CLOCK及BMAL1蛋白的表达水平在HIBD后48小时高于假手术组(P＜0.05),0小时、2小时、12小时、24小时、36小时与假手术组相比差异均无统计学意义(P＞0.05);②新生大鼠松果体的钟基因蛋白CLOCK和BMAL1的变化趋势基本一致。2.在临床研究部分:①HIE新生儿组PBLC中Clock mRNA和Bmall mRNA的表达水平均低于对照组(P＜0.05);②HIE组PBLC中Clock mRNA、Bmall mRNA表达水平的变化趋势基本一致。3.HIBD新生大鼠松果体中CLOCK及BMAL1蛋白的含量变化与HIE新生儿PBLC中Clock mRNA和Bmall mRNA表达水平的变化似乎呈相反趋势。结论:缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠松果体中CLOCK和BMAL1蛋白合成在损伤早期影响不明显,但在48小时有显著升高;并在HIE新生儿外周血淋巴细胞中Clock mRNA、Bmall mRNA也出现明显变化,两者可能共同参与缺氧缺血时昼夜节律紊乱的发生。