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目的：探讨在6-OHDA诱导的帕金森大鼠模型中P2X4受体及凋亡蛋白caspase-3的表达情况，调控ATP-P2X4受体信号轴对凋亡蛋白caspase-3相对表达量的影响。
方法：本实验选取雄性Wistar大鼠为实验对象，将大鼠随机分成8组，每组20只。将大鼠麻醉，准确定位左侧黑质后，按照以下方式处理各组实验动物：空白对照组、6-OHDA组大鼠黑质注射含0.3%抗坏血酸的生理盐水，携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组、携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组黑质内注射携带空载si-RNA慢病毒，携带过表达si-RNA慢病毒阴性对照组、携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组黑质内注射携带过表达si-RNA慢病毒，携带抑制性si-RNA慢病毒阴性对照组、携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组注射携带抑制性si-RNA慢病毒。在适应实验环境1周后，构建大鼠PD模型，在上述空白及阴性对照组动物脑内含0.3%抗坏血酸的生理盐水，在上述各6-OHDA组大鼠黑质中注射6-OHDA溶液。造模后饲养1周进行阿扑吗啡诱发实验，筛选旋转实验阳性的成功PD动物模型。将大鼠处死后，对其脑组织进行冰冻切片及免疫荧光染色，计数TH阳性多巴胺能神经细胞数量。分离提取大鼠黑质总RNA及总蛋白，利用荧光实时定量PCR及蛋白印迹法检测各组大鼠中P2X4受体及凋亡蛋白caspase-3的mRNA及蛋白相对表达量。
结果：1、利用免疫荧光法检测TH阳性的多巴能神经细胞数量：与空白对照组相比，6-OHDA组TH阳性多巴胺能神经细胞数量明显减少(P＜0.01)，携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组细胞数无明显差异。在与携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组对比中，携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组细胞数明显减少，携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组则有所增加，两者均具有统计学意义(P＜0.01)。2、PCR法检测caspase-3mRNA的相对表达量：与空白对照组大鼠黑质中caspase-3mRNA的表达相比较，6-OHDA组明显升高(P＜0.01)。携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组大鼠黑质caspase-3mRNA的表达升高，具有统计学意义(P＜0.05)；而携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组表达较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组降低(P＜0.05)。3、westernblot检测大鼠黑质中caspase-3蛋白的相对表达量：与空白对照组相比，6-OHDA组蛋白表达增加(P＜0.01)。对比携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组，携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组caspase-3蛋白表达明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.01)；而携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组大鼠黑质中的蛋白较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
结论：当P2X4受体基因过表达时，caspase-3mRNA和蛋白的表达均增高，引起黑质内功能细胞丢失增多。当抑制P2X4受体基因表达时，caspase-3基因及蛋白的表达均较携带空载病毒的PD大鼠下降，相应地减少了黑质内多巴胺能神经元的丢失。ATP-P2X4受体信号轴能够在帕金森病模型中，可通过调控caspase-3的表达参与其发病过程。
方法：本实验选取雄性Wistar大鼠为实验对象，将大鼠随机分成8组，每组20只。将大鼠麻醉，准确定位左侧黑质后，按照以下方式处理各组实验动物：空白对照组、6-OHDA组大鼠黑质注射含0.3%抗坏血酸的生理盐水，携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组、携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组黑质内注射携带空载si-RNA慢病毒，携带过表达si-RNA慢病毒阴性对照组、携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组黑质内注射携带过表达si-RNA慢病毒，携带抑制性si-RNA慢病毒阴性对照组、携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组注射携带抑制性si-RNA慢病毒。在适应实验环境1周后，构建大鼠PD模型，在上述空白及阴性对照组动物脑内含0.3%抗坏血酸的生理盐水，在上述各6-OHDA组大鼠黑质中注射6-OHDA溶液。造模后饲养1周进行阿扑吗啡诱发实验，筛选旋转实验阳性的成功PD动物模型。将大鼠处死后，对其脑组织进行冰冻切片及免疫荧光染色，计数TH阳性多巴胺能神经细胞数量。分离提取大鼠黑质总RNA及总蛋白，利用荧光实时定量PCR及蛋白印迹法检测各组大鼠中P2X4受体及凋亡蛋白caspase-3的mRNA及蛋白相对表达量。
结果：1、利用免疫荧光法检测TH阳性的多巴能神经细胞数量：与空白对照组相比，6-OHDA组TH阳性多巴胺能神经细胞数量明显减少(P＜0.01)，携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组细胞数无明显差异。在与携带空载si-RNA慢病毒阴性对照组对比中，携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组细胞数明显减少，携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组则有所增加，两者均具有统计学意义(P＜0.01)。2、PCR法检测caspase-3mRNA的相对表达量：与空白对照组大鼠黑质中caspase-3mRNA的表达相比较，6-OHDA组明显升高(P＜0.01)。携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组大鼠黑质caspase-3mRNA的表达升高，具有统计学意义(P＜0.05)；而携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组表达较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组降低(P＜0.05)。3、westernblot检测大鼠黑质中caspase-3蛋白的相对表达量：与空白对照组相比，6-OHDA组蛋白表达增加(P＜0.01)。对比携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组，携带过表达si-RNA慢病毒6-OHDA组caspase-3蛋白表达明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.01)；而携带抑制性si-RNA慢病毒6-OHDA组大鼠黑质中的蛋白较携带空载si-RNA慢病毒6-OHDA组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
结论：当P2X4受体基因过表达时，caspase-3mRNA和蛋白的表达均增高，引起黑质内功能细胞丢失增多。当抑制P2X4受体基因表达时，caspase-3基因及蛋白的表达均较携带空载病毒的PD大鼠下降，相应地减少了黑质内多巴胺能神经元的丢失。ATP-P2X4受体信号轴能够在帕金森病模型中，可通过调控caspase-3的表达参与其发病过程。