背景胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,在全球的发病率高居恶性肿瘤的第4位,死亡率则高居恶性肿瘤第2位。胃癌的发生发展是一个多环节、多步骤的复杂过程。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在胃癌中高表达,且在胃癌发生、进展和侵袭转移过程中起着关键作用。过表达的COX-2可产生大量的前列腺素(Prostaglandins, PGs),前列腺素特别是前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2),通过G蛋白偶联受体作用,与COX-2共同通过参与细胞恶性转化、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管新生、抑制抗肿瘤免疫等机制调控多种肿瘤发生、血管生成、侵袭转移等过程。因此,COX-2可能是抗肿瘤作用的一个靶点。目前,临床常用的COX-2抑制剂主要是非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs),包括非选择性COX抑制剂和选择性COX-2抑制剂(COXIBs)。流行病学和临床研究已经证实,NSAIDs不仅可有效预防胃肠道肿瘤,且对胃癌具有治疗作用。然而,长期应用非选择性NSAIDs可引起腹痛、消化性溃疡、消化道出血甚至穿孔；选择性COX-2抑制剂虽然消化道的副作用减轻,但其心血管毒性亦不可忽视,限制了其在肿瘤防治中的作用。因此,更为安全有效的COX-2的抑制剂有待进一步发现和研究。青蒿琥酯(Artesunate, Art)是从传统中药菊科植物黄花蒿(Artemisia annuaL.,)中提取的倍半萜内酯类化合物青蒿素的衍生物,是疟疾治疗的经典药物。研究证实,青蒿琥酯具有广泛的药理学作用,包括抗炎、抗病毒、抗氧化、肝脏保护、抗过敏、降血糖及抗菌等。近年来,大量的研究发现,青蒿琥酯在体内外对多种肿瘤细胞均有抗肿瘤作用。但是,青蒿琥酯对于肿瘤中特别是胃癌中COX-2的作用及其意义并未报道。此外,前期研究发现,在胃癌中组织中PGE2受体EP1高表达。因此本研究以COX-2、PGE2及EP1为切入点,对青蒿琥酯在胃癌中特别是侵袭转移中的作用及其作用机制进行探讨。实验一青蒿琥酯通过下调COX-2表达、PGE2合成及EP1表达抑制胃癌细胞增殖及诱导细胞凋亡目的：观察青蒿琥酯对胃癌细胞增殖活性和细胞凋亡的影响,并探讨青蒿琥酯对胃癌的抑制作用是否与其下调COX-2表达、PGE2合成及EP1表达有关。方法：以胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803细胞株为研究对象,MTT法检测不同浓度青蒿琥酯处理三种细胞株后细胞存活率；选取青蒿琥酯作用效果最明显的细胞株,MTT法检测PGE2和选择性EP1激动剂ONO-DI-004对细胞增殖的影响及青蒿琥酯对PGE2和ONO-DI-004刺激细胞增殖的影响；青蒿琥酯处理胃癌细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot方法检测COX-2、 EP1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达情况；分光光度法检测细胞Caspase-3、 Caspase-9活性；ELISA法检测胃癌细胞上清液中PGE2含量；Rho123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位水平。并采用MTT法及流式细胞术检测COX-2特异性抑制剂塞来昔布对胃癌细胞增殖和凋亡的影响；应用COX-2 siRNA转染胃癌细胞,RT-PCR及Western blot方法检测COX-2 mRNA和蛋白水平的变化,并采用MTT法及流式细胞术检测转染前后对细胞增殖和凋亡的影响。结果：青蒿琥酯对BGC-823、HGC-27、MGC-803三组胃癌细胞株均有抑制作用,且对HGC-27细胞的抑制作用最为明显,呈明显的时间和剂量依赖性；流式细胞仪检测结果显示青蒿琥酯可诱导HGC-27细胞凋亡；青蒿琥酯可下调HGC-27细胞COX-2表达、降低上清液中PGE2含量,并抑制EP1表达；PGE2和ONO-DI-004处理后HGC-27细胞活力均明显增强,青蒿琥酯可抑制PGE2和ONO-DI-004诱导的HGC-27细胞活力的增加；塞来昔布处理或COX-2 siRNA转染后,HGC-27细胞活力显著降低,且细胞凋亡率增加；此外,青蒿琥酯处理后,HGC-27细胞Bax蛋白表达上调,而下调Bcl-2蛋白的表达,Caspase-3、Caspase-9活性增高,呈浓度依赖性；细胞线粒体膜电位下降。结论：青蒿琥酯可抑制HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡,可能的机制是通过下调COX-2表达、PGE2合成及EP1表达,激活线粒体凋亡途径。实验二青蒿琥酯通过下调COX-2表达、PGE2合成及EPl表达抑制胃癌上皮间质转化降低细胞侵袭能力目的：观察青蒿琥酯对HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨青蒿琥酯降低HGC-27细胞侵袭能力是否与其下调COX-2表达、PGE2合成及EP1表达有关。方法：不同浓度青蒿琥酯处理HGC-27细胞24 h后,采用Transwell进行细胞侵袭试验；划痕试验进行细胞迁移试验；免疫荧光检测细胞膜E-cadherin蛋白表达；Western blot方法检测COX-2、EP1、NF-κB通路蛋白、EMT标志物、ERK/MAPK通路蛋白和PI3K/Akt通路蛋白表达；Transwell法检测PMA、PGE2及ONO-DI-004对HGC-27细胞侵袭能力的影响,并检测青蒿琥酯对PMA.PGE2及ONO-DI-004诱导HGC-27细胞侵袭能力增加的影响,Western blot方法检PMA对HGC-27细胞COX-2表达及青蒿琥酯对PMA诱导HGC-27细胞COX-2表达增加的影响；Transwell法检测塞来昔布、COX-2 siRNA转染及NF-κB通路阻滞剂PDTC对HGC-27细胞侵袭能力的影响；Western blot方法检测COX-2 siRNA转染对HGC-27细胞E-cadherin、ERK/MAPK通路蛋白和PI3K/Akt通路蛋白表达的影响。结果：青蒿琥酯可抑制HGC-27细胞侵袭和迁移,并降低COX-2表达、PGE2合成及EP1表达,且可抑制PMA、PGE2及ONO-DI-004诱导的细胞侵袭能力的增加；青蒿琥酯可上调E-cadherin表达并下调Vimentin、Fibronectin表达；青蒿琥酯处理后,HGC-27细胞核内NF-κB/p65表达降低,胞浆IκBα表达升高,同时胞浆IKKα表达降低；细胞总的ERK水平无明显改变,而ERK磷酸化水平降低；细胞总的Akt表达量没有变化,而p-Akt表达减少,同时,Akt下游效应蛋白p-GSK-3β表达也减少。塞来昔布、COX-2 siRNA转染及NF-κB通路阻滞剂PDTC均可降低HGC-27细胞侵袭能力；COX-2 siRNA转染后可上调E-cadherin表达,并下调p-ERK、p-Akt及p-GSK-3β表达。结论：青蒿琥酯可降低HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能是通过降低COX-2表达、PGE2合成阻滞ERK/MAPK通路蛋白和PI3K/Akt通路,进而抑制EMT,最终降低细胞侵袭能力。