研究目的：细胞应激是细胞处在不利生存条件下所采取的保护性的应答方式，细胞应激也分为多种，比如氧化应激，病毒感染，缺氧应激等等，对于不同的应激，细胞内会有不同的信号通路应答相对应的应激刺激，其中应激颗粒（SGs）的形成是细胞应激过程中一个重要方面。Tudor-SN蛋白作为一种多功能蛋白，在细胞应激过程中发挥着重要的作用，例如在植物中，Tudor-SN蛋白可以提高植物的应激耐受力，并可稳定敏感的mRNA的水平，对于植物在高盐、高渗的环境下生长至关重要。近年来陆续有文献报道，Tudor-SN蛋白可以参与应激颗粒的形成，并起到抗凋亡、促进细胞存活的作用。本课题旨在通过对 Tudor-SN蛋白的关键性磷酸化位点在其参与应激颗粒形成过程中作用的研究，进而深入探讨其在应激过程中发挥的重要作用。　　方法：本课题分为三个部分，第一部分是构建pCMV-N-Tudor-SN(T103A)-Flag、pmCherry-C1-Tudor-SN(T103A)两种点突变质粒，首先通过定点突变技术将 T hr103(T103)位点进行突变，然后利用质粒构建技术，将目的片段与载体相连接，该两种质粒可以为后续的CoIP及免疫荧光实验提供必要的实验基础。第二部分是T103点突变对Tudor-SN蛋白参与应激颗粒形成的影响。这部分分为三个方面，第一方面利用重组质粒，观察T103点突变后对Tudor-SN蛋白与应激颗粒共定位的影响。第二方面，利用CoIP技术，研究点突变情况下，Tudor-SN蛋白与应激颗粒蛋白组分的结合情况。第三方面，利用 RIP技术，研究点突变情况下，Tudor-SN蛋白与应激颗粒mRNA组分结合的情况。第三部分是应激条件下磷酸化 Tudor-SN蛋白的上游激酶分析。此部分分为四个方面。第一方面， Tudor-SN蛋白 T103位点潜在激酶生物信息学预测。利用磷酸化数据库网站对Tudor-SN蛋白的潜在激酶进行预测。第二方面，Tudor-SN蛋白与潜在激酶的结合检测。利用 CoIP技术检测 Tudor-SN蛋白与一些潜在激酶的结合情况。第三方面，Tudor-SN蛋白潜在激酶的验证。利用体外激酶检测技术，确定能够直接磷酸化 Tudor-SN蛋白 T103位点的激酶。第四方面，抑制 JNK激酶活性对Tudor-SN磷酸化水平及其参与应激颗粒形成的影响。给予JNK抑制剂的情况下，利用Western blot技术检测T103位点磷酸化程度的变化，利用免疫荧光技术检测Tudor-SN蛋白与应激颗粒的共定位情况。　　结果：　　①两种质粒 pCMV-N-Tudor-SN(T103A)-Flag、pmCherry-C1-Tudor-SN(T103A)能够在细胞中融合表达，证明质粒构建成功，可以用于后续实验。　　②Tudor-SN蛋白T103位点突变后，其不能与应激颗粒共定位。　　③CoIP实验结果显示，T103位点突变可导致其与颗粒组分蛋白G3BP、TIAR的结合减弱。　　④RIP结果显示， T103位点突变没有影响其与应激颗粒 mRNA组分AGTR1-3UTR的影响。　　⑤Tudor-SN蛋白与其潜在磷酸化激酶JNK有结合，和激酶p38没有结合。　　⑥激活的JNK可以直接磷酸化Tudor-SN蛋白的T103位点。　　⑦给予JNK抑制剂，可以使T103位点的磷酸化水平下降，且定位于应激颗粒的T103位点磷酸化的Tudor-SN蛋白明显减少。　　结论：　　①在亚砷酸盐刺激条件下，Tudor-SN蛋白T103位点磷酸化是其能够进入应激颗粒的先决条件。　　②Tudor-SN蛋白T103位点磷酸化能够影响其与应激颗粒蛋白组分的结合，但不会影响其与AGTR1-3UTR的结合。　　③JNK是磷酸化Tudor-SN蛋白T103位点的直接激酶。