静脉疾病一直以来都是危害人类身体健康的常见疾病之一。近年来，随着社会的发展和人们生活水平的提高、饮食习惯的改变，静脉疾病的发病率日渐升高，对静脉疾病的诊治在血管外科甚至在整个外科领域占有越来越重要的地位。原发性下肢深静脉瓣膜功能不全(Primarydeepveinvalveinsufficienoy，PDVI)是一种十分常见的静脉疾病，大约占血管外科静脉疾病的超过一半以上。 PDVI的原发性病理改变主要包括两个方面：1、股浅静脉瓣膜发育缺陷，静脉瓣膜缺失、畸形或延长下垂使得瓣膜关闭不完全；2、瓣膜区静脉管壁松弛、扩张导致相对性的瓣膜管壁不全。然而，静脉瓣膜或管壁发生的这些形态学上的改变究竟是由什么原因引起的、涉及哪些具体分子机制?迄今为止人们对此的了解还十分有限。 在对PDVI相关基因的研究中，我们发现多个差异表达的来源于已知或未知基因的cDNA片段，部分已经得到Northernblotting和半定量RT-PCR证实，表明这些基因确实参与了PDVI的发生或发展。其中一个548bp长的cDNA片段(NO.15克隆)在病变的静脉壁组织中高度表达，序列分析表明该片段与Homosapiensrashomologgenefamily,memberE(RhoE)基因有高度的同源性。但究竟是来源于RhoE基因本身，还是RhoE基因的变异?其蛋白产物究竟在血管平滑肌的病理改变中发挥什么样的作用?还需要对其进行深入研究。 RT-PCR等技术的飞速发展，为研究疾病发生过程中基因表达的变化提供了方便快捷的方法。本课题采用RT-PCR技术探讨PDVI病人大隐静脉管壁组织中RhoE基因表达的变化情况，同时对扩增出来的cDNA片段进行克隆、测序鉴定及序列分析，来初步探讨RhoE基因与PDVI的关系，将为最终阐明该基因的功能和在PDVI发病中的作用，进而了解其上游和下游分子机制奠定基础。 材料和方法以原发性下肢深静脉瓣膜功能不全并大隐静脉瓣膜功能不全患者手术中切除的功能不全大隐静脉的隐-股瓣膜区管壁组织为病例组标本，以非血管病死亡病人的正常大隐静脉相应部分组织为对照组标本。所有病例均经过血管彩超和静脉造影确诊，所有组织标本经病理切片检查确认。用TrizolReagent试剂提取组织总RNA；采用RT-PCR技术研究病例组与对照组RhoE基因片段的表达情况；采用TA亚克隆技术结合PCR法对RhoE基因扩增产物cDNA片段进行测序；采用Blastn软件对所获序列进行同源性分析，确保克隆产物来源于目的基因的mRNA序列，并用DNAStar软件对克隆出来的目的基因表达的蛋白的二级结构进行预测、分析。 结果提取组织总RNA后，用DNaseⅠ(RNasefree)去除痕量DNA污染，经1％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测，组织总RNA质量较好，没有mRNA的降解。将RT-PCR产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，观察、成像，经图像分析分析获得各例条带的相对积分光密度后，统计学分析，结果发现，病例组中RhoE的表达较对照组中明显增高，差异具有统计学意义；对扩增产物进行克隆、测序，测序结果经Blastn软件比对，证实扩增产物来源于RhoE基因的mRNA序列。用DNAStar软件对克隆的目的基因的序列可能表达的蛋白质的二级结构进行预测，发现该蛋白含有6个亲水性较好的强抗原决定簇。 结论1、RhoE的表达水平在PDVI患者静脉组织中比在正常静脉组织中明显上调，RhoE在PDVI的形成和发展中可能产生作用。 2、序列分析表明该序列表达的蛋白含有6个亲水性较好的强抗原决定簇。