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风湿性心脏病（Rheumatic heart disease,RHD）是A组溶血性链球菌感染后风湿热引起的自身免疫性疾病。该疾病主要累及二尖瓣，表现为瓣膜狭窄和关闭不全。RHD在我国仍有较高的患病率，是导致慢性心力衰竭及致死的主要心血管疾病之一。在感染链球菌后长期的慢性疾病发展过程中，心脏瓣膜组织是如何发生病变从而导致RHD发生的，目前确切机制并不明确，研究其致病机制并进一步寻找RHD的新干预靶点具有重要意义。 研究目的： 构建RHD组大鼠模型，检测RHD大鼠及control组大鼠外泌体中miR-155的表达差异，检测两组瓣膜组织中磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine1-phosphate receptor1，S1PR1)的表达情况。初步探讨两组大鼠中循环外泌体miR-155和S1PR1表达差异，利用荧光素酶报告基因系统验证S1PR1与miR-155靶标的关系。 研究方法: 30只Lewis雌性大鼠随机化分为RHD组和control组，每组各15只。构建RHD大鼠模型:第1周，RHD组于足垫皮下注射0.2ml抗原Ⅰ（灭活GAS菌液∶完全弗氏佐剂乳化剂=1∶1）。给药间隔周期为7天，于第2周、3周、4周、5周腹部皮下注射0.5ml抗原Ⅰ。control组在同样时间点、同样剂量、同样部位注射无菌生理盐水+完全弗氏佐剂乳化剂。从第6周开始，RHD组予腹部皮下注射0.5ml抗原Ⅱ（灭活GAS菌液），给药间隔周期为7天，直至第28周造模结束，control组在同样时间点、同样剂量、同样部位注射无菌生理盐水。32周模型构建结束。造模结束后大鼠行经胸心脏彩超检查，在不同的切面对比两组大鼠左室射血分数(EF％)值、左室短轴缩短分数(FS％)值、E/A比值。造模结束后处死大鼠，大鼠血浆提取外泌体并鉴定其形态，提取外泌体总RNA行荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)检测两组大鼠血浆外泌体中miR-155的表达情况，部分大鼠心肌及二尖瓣瓣膜组织行HE染色、Masson染色，部分二尖瓣瓣膜组织行免疫蛋白印迹(Western blot，WB)、PCR检测S1PR1的表达情况。同时利用生物信息学的方法在线预测miR-155与S1PR1的结合位点，构建含有结合位点的S1PR1的3UTR突变型质粒，将重组质粒与miR-155和miR-NC共转染293T细胞，通过过表达miR-155后，检测荧光素酶活性变化，定量反映miR-155对S1PR1的抑制作用。 研究结果： 1、造模过程中，RHD组大鼠死亡2只，control组大鼠死亡0只;2、造模结束后RHD组大鼠EF％为55.06±6.56，control组大鼠EF％为77.80±5.97，P值＜0.05，差异有统计学意义;RHD组大鼠FS％为23.60±3.90，control组大鼠FS％为39.83±5.60，P值＜0.05，差异有统计学意义;RHD组大鼠E/A比值为0.72±0.12，control组E/A比值为1.56±0.18，P值＜0.05，差异有统计学意义。3、瓣膜组织HE染色结果示，RHD组中有3只大鼠存在心肌炎症细胞浸润;RHD组中有10只大鼠二尖瓣瓣膜组织存在慢性淋巴细胞、浆细胞浸润，出现胶原蛋白增生、钙盐沉积及血管新生等现象。RHD组大鼠瓣膜炎比例占76.9％(10/13);control组二尖瓣瓣膜组织未发现炎症细胞浸润。4、Masson染色结果示，control组染色呈现淡蓝色，胶原纤维无明显增生现象;RHD组染色明显加深，胶原纤维增生明显，排列紊乱。5、RHD大鼠循环外泌体中miR-155表达量较control组大鼠的表达量高，p＜0.05，差异具有统计学意义。6、在mRNA基因水平及蛋白水平，RHD组大鼠瓣膜组织中S1PR1表达量较control组均下降。7、与共转染S1PR1-3UTR和miR-NC组相比，共转染S1PR1-3UTR和miR-155组荧光素酶活性下降明显，P＜0.05。 研究结论： RHD大鼠循环外泌体中的miR-155表达升高，瓣膜组织中S1PR1表达量下调;miR-155可能靶向S1PR1表达参与RHD的发生发展过程。