力达霉素对K562细胞的作用及分子机制研究

来源 :河北联合大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lx305954308
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目的:通过探讨力达霉素抑制人白血病细胞增殖和诱导白血病细胞凋亡的作用,为力达霉素在白血病的临床应用上提供新的思路和理论依据。  方法:选用 K562细胞,悬浮细胞常规培养条件:含10%FBS的1640培养基,青霉素和链霉素各100μl/mg,5%CO2,37℃,待细胞处于对数生长期时,将细胞种到六孔培养细胞板或6 cm细胞培养板,48 h后按照实验要求将不同浓度的LDM加入到培养的细胞中。处理48 h后收集细胞并进行检测和分析。细胞增殖主要通过MTT比色法检测力达霉素对 K562细胞增殖的影响;利用台盼蓝染色计算不同浓度力达霉素对 K562细胞的抑制率。台盼蓝染色后,透明无色的为正常细胞,深染的为死细胞,镜下取5个视野,计算抑制率。细胞凋亡检测主要通过HE染色、瑞氏吉姆萨染色、吖啶橙染色进行形态学观察。细胞处理后,70%乙醇固定30分钟,PBS洗涤2次,流式细胞仪进行检测。通过提取细胞蛋白进行Western蛋白定量检测TNF-?、Caspase-8含量表达。  结果:力达霉素对 K562细胞增殖有一定的抑制作用,用10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L浓度的力达霉素分别作用 K562细胞48 h,抑制率分别为(21.2?2.48)%、(37.5?0.88)%、(52.1?1.24)%、(64.5?1.61)%和(71.3?2.00)%。通过HE染色和瑞氏姬姆萨染色,荧光显微镜下可见胞膜皱缩,有泡状突起及不规则凹陷,胞核染色质浓缩,固缩,浓染,断裂成团块分散在胞膜周边。荧光显微镜下观察 K562细胞经吖啶橙染色后,细胞性状不规则,出现新月形,细胞核碎裂成点状。流式细胞仪结果显示,不同浓度力达霉素均能诱导 K562细胞发生凋亡。Western Blot分析显示,分别用10-8 mol/L、10-10 mol/L、10-12 mol/L浓度的LDM处理细胞48 h后,TNF-?蛋白的表达量依次为0.42?0.01、1.67?0.13(P<0.01)和2.41?0.08(P<0.01),与对照组0.23?0.02相比,吸光度值比升高。分别用10-8 mol/L、10-10 mol/L、10-12 mol/L浓度的LDM处理细胞48 h后,Caspase-8表达含量依次为0.44?0.17(P<0.05),4.50?0.17(P<0.01=和4.90?0.10(P<0.01),与对照组0.19?0.08相比,吸光度值比升高。  结论:1低浓度力达霉素对人白血病 K562细胞增殖有抑制作用。2力达霉素诱导人白血病K562细胞发生凋亡。3力达霉素可能通过TNF-α活化 Caspase-8酶系来诱导细胞凋亡。  图9幅;表1个;参72篇。
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