小黄鱼性腺发育周期观察及相关基因LpCullin2表达模式研究

来源 :浙江海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w_wallace
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性腺发育是鱼类发育生物学研究领域中的重要组成部分,近年来,小黄鱼(Larimichthys polyactis)面临着低龄化、性早熟、小型化等问题。因此,开展小黄鱼繁殖生物学、人工繁殖及增养殖技术等方面的研究成为当下非常重要的研究思路和研究方向。为进一步丰富小黄鱼人工养殖的实践技术,获得更加详细的小黄鱼性腺发育情况的基础数据。本研究主要从两个方面进行阐述:一是通过苏木精-伊红(HE)染液对小黄鱼不同发育时期的组织切片进行染色观察;二是通过克隆得到小黄鱼的Cullin2基因(Lp Cullin2)的开放阅读框,并通过荧光定量PCR分析该基因在小黄鱼不同组织以及性腺发育不同时期的表达情况。主要结果如下:一、本文主要采用石蜡切片对小黄鱼的性腺发育进行观察,旨在了解性腺发育过程中组织形态变化,进一步掌握小黄鱼的繁殖变化规律,丰富小黄鱼生物学方面的研究。为开展小黄鱼种质资源的保护和开发以及培育出高质量的小黄鱼提供强有力的支撑,同时为其他石首鱼科的基础研究提供参考依据。通过研究发现,小黄鱼性腺存在周期性变化,雌鱼性腺指数(Gonadosomatic Index,GSI)和雄鱼GSI的周年变化趋势大体基本一致,但在GSI在数值和变化幅度方面,雌鱼会明显高于雄鱼。通过组织学切片的方法观察小黄鱼性腺发育可以分为6个时期,产卵类型为部分同步产卵,繁殖周期为一年,主要繁殖期为4-5月。二、通过克隆获得了Lp Cullin2基因的开放阅读框,该基因长度为3080bp,共编码745个氨基酸。通过多序列比对、蛋白三维结构图以及系统进化树的结果表明Cullin2基因在不同物种以及系统进化的过程中高度保守。为了进一步了解Cullin2在小黄鱼体内的表达情况,通过实时荧光定量PCR技术对小黄鱼的肠道、血液、精巢、卵巢、肌肉、头肾、脑、肝、心、鳃以及脾进行检验。结果表明:Lp Cullin2基因在肠道、血液、精巢、卵巢、肌肉、头肾、脑、肝、心、鳃以及脾中均有表达,但是在精巢和卵巢中的相对表达量最高,在肠道中的相对表达量最低。同时对精巢和卵巢不同时间段的相对表达量进行检测,结果表明:Lp Cullin2在不同时间相对表达量存在差异,1月份的相对表达量较高,在8、9月份的相对表达量较低。
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