利拉鲁肽对MC3T3-E1细胞增生分化过程中内质网应激的影响

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目的:观察利拉鲁肽(liraglutide)对MC3T3-E1前成骨细胞增殖分化的影响,并探讨其与内质网应激的关系。方法:1、体外用完全培养基培养MC3T3-E1前成骨细胞,加入不同浓度的利拉鲁肽(0、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L),24h后用CCK8法检测细胞的增殖活性。2、体外用完全培养基培养MC3T3-E1前成骨细胞,加入不同浓度的利拉鲁肽(0、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L),24h后用Ed U法检测细胞的增殖情况。3、体外用成骨培养基培养MC3T3-E1前成骨细胞,加入不同浓度的利拉鲁肽(0、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L),48h后用碱性磷酸酶试剂盒测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活力。4、体外用成骨培养基培养MC3T3-E1前成骨细胞5天,于第6天加入最适浓度10-7mol/L利拉鲁肽处理MC3T3-E1细胞0h、1h、3h、5h、10h,QT-PCR技术检测BIP、XBP1基因的表达水平。5、体外用成骨培养基培养MC3T3-E1前成骨细胞5天,于第6天加入最适浓度10-7mol/L利拉鲁肽处理MC3T3-E1细胞0h、1h、3h、5h、10h,Western blot检测BIP、XBP1蛋白的表达量。结果:1、与对照组相比,10-6、10-7、10-8、10-9mol/L利拉鲁肽组OD值分别升高了0.042、0.073、0.038、0.032(P<0.05),10-7mol/L利拉鲁肽组OD值升高最显著。2、Ed U结果显示,增殖中的细胞,细胞核被Ed U染色,荧光镜下呈红色,随着利拉鲁肽浓度的增加,染成红色的细胞核增多,其中10-7mol/L利拉鲁肽组细胞核密度最大,促进细胞增殖的作用最显著。3、与对照组相比,10-6、10-7、10-8、10-9mol/L利拉鲁肽组ALP活性分别升高了 0.400、0.717、0.321、0.303(P<0.05),10-7mol/L利拉鲁肽组ALP活性升高最显著。4、与0h比较,10-7mol/L利拉鲁肽处理后,BIP基因的表达随时间的增加而增高,1h和3h无显著变化(P>0.05),5h(1.983±0.230,P<0.05)和10h(2.469±0.256,P<0.05)表达明显增加;XBP1基因的表达在1h无显著变化(P>0.05),3h显著升高(3.449±0.246,P<0.05),5h有下降趋势(1.597±0.259,P<0.05),10h又升高(2.412±0.274,P<0.05)。5、与0h比较,10-7mol/L利拉鲁肽处理后,BIP蛋白的表达随时间的增加而增高,1h和3h无显著变化(P>0.05),5h(1.2512±0.2592,P<0.05)和10h(1.4053±0.3151,P<0.05)表达明显增加;XBP1蛋白的表达在1h无显著变化(P>0.05),3h显著升高(1.4347±0.1821,P<0.05),5h有下降趋势(1.0648±0.1744,P<0.05),10h又升高(1.2183±0.1446,P<0.05)。结论:1、利拉鲁肽促进MC3T3-E1细胞的增殖。2、利拉鲁肽促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。3、利拉鲁肽上调内质网应激IRE1-XBP1通路中BIP、XBP1基因的表达。4、利拉鲁肽上调内质网应激IRE1-XBP1通路中BIP、XBP1蛋白的表达。
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