在法医鉴定里,精斑是性犯罪中的重要证据之一,其作用不可替代,一般可以作为案件定性的主要依据。显微镜镜检精子细胞、免疫学方法以及组织化学等方法常用于检验精斑,但每种检测方法都存在一定的优势及不足。目前,在法医鉴定中得以广泛应用的精斑分离方法是差异裂解法,然而在实际操作中,由于检材的多样性,存在精斑混合女性分泌物、精斑混合血斑、多人精斑、精子量过少等复杂情况,能否有效处理这些情况将直接影响到后期精斑检测的准确性,而差异裂解法只能解决部分问题,有时难以得到嫌疑人的单一DNA分型。因此,对混合精斑进行分离确证是近年来研究的重点和物证检验中的难点。研究表明,精斑试纸条法是检测前列腺特异性抗原(PSA)的灵敏度较高的简便方法,可以用于确证精斑的存在,达到快速筛选的效果;免疫磁珠法采用磁性分离技术,可以捕获精斑中的精子核酸,用于纯化、扩增和检测;激光捕获显微分离技术则可以捕获单一精子,以确保准确获得单一DNA分型。因此,针对传统检测方法所存在的不足,本文联用精斑试纸条法、免疫磁珠法及激光捕获显微分离技术此三种技术,配合低体积扩增,必要时将获得的所有分型进行汇总、叠加,最后进行分类,从而获得每个精子供体的分型。本文以单一精斑为对照,对混合精斑进行检测。精斑试纸条法测试结果中,阴性对照未出现阳性反应,而各待测样本在测试区和控制区内均出现一紫红色线条,表明各待测样本中均含有前列腺抗原,提示精斑的存在,可应用于快速筛选有效检材,而采用免疫磁珠法替代差异裂解法第二步提取到的单一精斑核酸,进行后续扩增和检测获得的结果,与常规方法提取、扩增和检测后的结果进行对比分析,发现经免疫磁珠法处理的结果检出更完整有效的短串联重复序列(STR)分型,表明免疫磁珠法可用于替代差异裂解法的第二步提取,以获得更优的检测结果,且针对混合精斑难以分离的情况,应用激光捕获显微分离技术对混合精斑进行处理并经低体积扩增后,把结果进行汇总、叠加,可获得完整的单一分型。本文在实际的案件应用中,利用上述方法获得了完整的单一分型,案件得以快速破获。通过三种方法的联用,可满足多数情况下混合精斑的有效分离与检测。