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鳜是我国重要的名贵淡水养殖鱼类品种,传染性脾肾坏死病毒病(InfectiousSpleen and Kidney Necrosis Virus Diseases, ISKNVD)鳜养殖业中面临的最为严重的病毒性病原,自1990s早中期发现以来,每年都有造成了严重的经济损失。我们此前的研究对病毒的主要结构蛋白及其免疫原性做了比较系统的研究,为病毒免疫学诊断试剂的发展和基因工程苗的研制打下良好工作基础。本研究中,我们对纯化斑石鲷虹彩病毒(SKIV)和鳜来源ISKNV重新做了系统分析,结果发现病毒粒子的第4高分子量蛋白为病毒诱导的压力蛋白,命名为mVISP蛋白。免疫印迹和免疫电镜分析表明,mVISP是病毒的结构蛋白,且定位于病毒粒子的囊膜层。定量PCR结果显示感染了病毒的鳜鱼组织和细胞中,mVISP表达量随病毒感染有上升明显。间接免疫荧光实验显示mVISP抗体可以有效识别病毒感染细胞,但是该抗体没有显示中和病毒的作用。通过RNAi技术沉默mVISP蛋白,结果表明抑制mVISP蛋白的表达对ISKNV病毒复制不会产生显著影响。mVISP是第一个获得鉴定的宿主来源肿大细胞病毒囊膜蛋白,其在病毒发生和形成中的生物学功能尚需做进一步的深入研究。虹彩病毒的病毒颗粒包含有个结构层次,有内向外分别为位于病毒核心的,包含有病毒核酸和核酸结合蛋白的病毒核心层、位于衣壳层次内部的脂膜层、病毒的衣壳蛋白层及位于衣壳蛋白层外围的病毒囊膜层。我们此前的研究以ISKNV作为模式毒株对肿大细胞病毒的结构蛋白鉴定及其层次结果做了初步的研究,但这些病毒蛋白间的相互作用关系及其对病毒结构和生物学发生功能的影响还未可知。病毒蛋白之间势必存在相互作用以维系病毒蛋白的层次结构并维持病毒形态的稳定性。本文运用酵母双杂交技术,探索以主衣壳蛋白为核心的病毒蛋白间的相互作用。把MCP做为靶蛋白,MCP, VP007,VP036,VP037, VP041, VP056, VP063,VP071, VP101, VP117做为诱饵蛋白,共转酵母细胞,通过报告基因的筛选,发现MCP和VP071之间存在相互作用。反向酵母双杂交实验,以VP071做为靶蛋白,和其他蛋白一起共转酵母细胞,验证了VP071和MCP的相互作用,并且发现VP071蛋白自身有相互作用。我们通过进一步的免疫共沉淀CO-IP技术验证了MCP和VP071的相互作用。定量PCR结果显示ORF071为病毒晚期基因,WB结果显示VP071可能为病毒的衣壳蛋白,与MCP处于病毒的一个结构层次。细胞转染071-EGFP质粒,发现VP071引起细胞凋亡,并通过annexin V试剂盒进行了验证。在活体斑马鱼卵水平,我们通过TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测观察到了071在斑马鱼卵上产生的凋亡信号,并发现VP071诱导Caspase8转录水平和Caspase8活性的上升。基于同源重组原理,构建了VP071缺失的△m-071的重组病毒株,定量PCR显示,在△m-071株中ORF071的重组效率达到50~65%,△m-071-ISKNV对病毒在MFF-1细胞上的感染滴度没有显著影响,透射电镜下,△m-071-ISKNV与野生毒株在病毒形态上没有显著变化,上述结果显示ORF071是病毒的非必需基因。