外泌体miRNA-21对NSCLC风险预测价值的研究

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目的:1.探讨外周血中外泌体mi RNA-21、游离mi RNA-21、EGFR基因突变、肺癌相关肿瘤标志物CEA、SCCA、CYFRA21-1在NSCLC风险预测中的价值;2.分析外泌体mi RNA-21表达量与NSCLC病理分型、病理分期、TNM分期的相关性。方法:1.采集30例NSCLC患者(实验组)和30例正常人(对照组)血液标本5m L,要求为EDTA抗凝血。对全部60例血清样本进行外泌体提取,分别使用透射电子显微镜和Western Blot对所提取外泌体进行验证;2.采用q RT-PCR分别检测30例NSCLC血清样本和30例正常人血清样本中外泌体mi RNA-21和游离mi RNA-21表达量;采用液态芯片分析系统分别检测30例NSCLC血清样本和30例健康人血清样本中肿瘤标志物CEA、SCCA、CYFRA21-1含量;采用数字PCR检测30例NSCLC血清样本和30例正常人血清样本中肺癌驱动基因EGFR突变情况;3.采用SPSS22.0统计学软件进行统计学分析,比较以上实验结果在NSCLC组和正常组中是否有统计学差异,并进一步分析血清外泌体mi RNA-21与NSCLC患者病理分型、病理分期和TNM分期的关系。外泌体mi RNA-21、游离mi RNA-21、肿瘤标志物数据结果以(?)±s表示,因实验结果均不符合正态分布,两组间计量资料比较采用秩和检验,多组间计量资料比较用KW检验,行受试者工作特征(ROC)曲线对诊断效能进行分析。结果:1.成功提取血清中外泌体,在透射电子显微镜下观察,分离得到的外泌体径粒大小约40nm,和其他研究所所报道的30~100nm相同,呈囊泡状。Western Blot结果表明所提取外泌体富含表面标志CD63、CD81;2.NSCLC组外泌体mi RNA-21表达量为119.64±98.35,健康组外泌体mi RNA-21表达量为39.10±34.12,差异有统计学意义(P<0.05),行ROC曲线计算该指标对NSCLC的诊断价值,曲线下面积为87.6%;而NSCLC组血清游离mi RNA-21表达量为38.36±24.29,健康组血清游离mi RNA-21表达量为29.74±23.80,两者无统计学差异(P>0.05);3.NSCLC组EGFR基因突变率为43.3%,正常组EGFR基因无突变。通过EGFR基因是否突变对NSCLC进行风险预测,特异性为100%,敏感性为43.3%;4.通过绘制ROC曲线,CEA、SCCA、CYFRA21-1曲线下面积分别为52.1%、65.0%、60.9%,诊断效能较低,但如果三项指标联合诊断,曲线下面积显著提高,为77.3%,但仍低于血清外泌体mi RNA-21的86.7%;5.NSCLC患者血清外泌体mi RNA-21在不同病理分型中表达量分别为:腺癌119.17±61.36,鳞癌154.91±168.67,大细胞癌80.34±36.20,三者无统计学差异(P>0.05);在不同病理分期中表达量分别为:低分化146.86±72.61,中高分化112.19±39.40,差异有统计学意义(P<0.05);在不同TNM分期中表达量分别为:Ⅰ期85.28±68.30,Ⅱ期113.51±57.78,Ⅲ期63.54±23.59,Ⅳ期12.94±63.78,没有统计学差异(P>0.05)。结论:1.游离mi RNA-21不具备NSCLC风险预测价值;外泌体mi RNA-21具有较高的NSCLC风险预测价值;EGFR基因突变、肺癌相关肿瘤标志物的NSCLC风险预测价值较低;2.NSCLC患者外泌体mi RNA-21表达量与病理分型、TNM分期不相关;与病理分期相关,低分化癌患者外泌体mi RNA-21表达量更高。
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