自噬在巨噬细胞清除凋亡细胞中的作用

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目的研究巨噬细胞吞噬凋亡细胞后自噬结构的形态学特征,探讨自噬对于巨噬细胞清除凋亡细胞的作用,以及自噬与异噬的相互关系。方法用环磷酰胺分别诱导淋巴细胞和Jurkat细胞凋亡。将凋亡的淋巴细胞和Jurkat细胞加入巨噬细胞培养皿,计算凋亡细胞清除率。通过Giesma染色和扫描电镜观察巨噬细胞吞噬凋亡细胞的表面结构变化,透射电镜下观察巨噬细胞吞噬凋亡细胞后自噬前体、自噬体、自噬溶酶体和两性体的分布和结构特点,用图像分析仪测量自噬结构与细胞质的断面面积,求出面积之比。用MDC染色法标记巨噬细胞的自噬体,在激光共聚焦扫描显微镜下观察和计数。用3-MA抑制巨噬细胞的自噬,观察凋亡细胞被清除变化。结果巨噬细胞活跃地吞噬凋亡细胞、凋亡细胞核、凋亡小体或其他细胞碎片,形成异噬体。与对照组比较,吞噬凋亡细胞组的巨噬细胞发生自噬的细胞增多,巨噬细胞内自噬体数目增多,自噬前体、自噬体和自噬溶酶体与细胞质的断面面积之比增大。许多自噬体内可见凋亡小体或其他细胞碎片,这些自噬体的体积较大,多位于细胞膜下。亦可见内含细胞质样物质、损伤线粒体或内质网等的自噬体,多位于线粒体和粗面内质网附近。未观察到含有整个凋亡细胞或凋亡细胞核的自噬体。在部分细胞出现吞噬体和自噬体融合而成的两性体。两性体内含凋亡细胞碎片和完整自噬体内膜结构。当巨噬细胞自噬受抑制时,凋亡细胞清除率降低。结论巨噬细胞清除凋亡细胞时自噬功能显著增强。自噬对于凋亡细胞的清除起着重要的直接和间接作用。在凋亡细胞清除时,自噬途径和异噬途径可通过两性体的形成发生密切联系。
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