论文部分内容阅读
本文依据枯草芽孢杆菌B.C119最适合的发酵条件进行发酵,从其发酵液中分离纯化出细菌素C1,并对其性质、结构、安全性及应用进行了初步的研究,为食品生物防腐剂的研发提供理论依据。在pH为7.0的牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃、120r/min、24h震荡培养,然后4000r/min转,20min除菌体,以65%饱和度的硫酸铵对上清液进行分级盐析,得到细菌素C1粗品。经过透析除盐,浓缩蛋白粗提液经过Sephadex G-50和DEAE-Sepharose Fast Flow得到纯化的细菌素C1。经SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明,分离纯化后的细菌素C1的分子量约为11.0kDa。通过对细菌素C1进行温度,pH、蛋白酶、有机溶剂的敏感性测定,发现细菌素C1有很好的热稳定性,经过121℃热处理30min,细菌素活性没有完全丧失,活性下降了33.3%；在pH小于3或大于10.0时,活性下降明显,与pH4.0～9.0的活性相比,pH为11.0时降低为64.0%,pH为12.0时降低为42.6%。细菌素C1对各种有机溶剂的敏感程度不同,其中,经苯处理后的细菌素抗菌活性保留最大,为对照组的95.4%,而经甲酸处理后,其活性会完全丧失。细菌素C1对蛋白海非常敏感,尤其是胃蛋白酶,活性下降了47.8%。经过薄层层析进行氨基酸分析,细菌素C1含有酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸,不含缬氨酸,同时还含有未知物质,细菌素C1组分及结构组成有待进一步研究。急性毒性实验结果表明ICR小鼠一次经口灌胃0.02g/kg.BW未发现有小鼠死亡或明显的表现中毒症状,肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数也没有明显差异；小鼠30天喂养实验表明在每天喂食剂量为0.02g/kg.BW时,小鼠的体重增重、饲料利用率、肝脏、脾脏、肾脏及其指数均无显著变化,饲喂该细菌素Cl对以上指标无显著影响。细菌素C1(浓度为0.5mg/mL)单独使用时,在较低温度下(5℃),pH为5.6时,香肠的保质期可延长67%,细菌素C1与化学防腐剂山梨酸钾结合使用时(细菌素C1：山梨酸钾=1：2),保质期延长了100%。