简青霉CEF-818防治棉花主要土传病害潜力评估及发酵工艺优化

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棉花是重要的纤维作物之一,具有很高的经济价值,棉花黄萎病、枯萎病、立枯病和红腐病等土传病害严重影响了棉花的优质高产,近年来,筛选有效的生防微生物已成为防治棉花土传病害的重要途径之一。本研究以棉花内生真菌简青霉(Penicillium simplicissimum)CEF-818为生防菌,以棉花强致病力菌株大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、立枯病菌(Rhizoctonia solani)、红腐病菌(Fusarium verticilliodesin)为病原菌,采用对峙培养法、对扣培养法和圆盘滤膜培养法检测CEF-818对病原菌的抑菌率,在温室和田间试验中,主要采用基质接种法、灌根接种法、浸种接种法进一步检测CEF-818对棉花主要土传病害的防治效果。通过测定棉花叶片活性氧爆发和胼胝质沉积、RT-PCR法检测棉花叶片中防御相关基因的表达及采用q-PCR检测棉苗根中V.dahliae的定殖量来初步探究菌株CEF-818诱导抗病能力。采用单因素试验法和正交试验法对CEF-818固体发酵培养基的组成以及发酵条件进行了优化,主要得出以下结果:(1)对峙培养法测定了菌株CEF-818整体代谢产物对V.dahliae、F.oxysporum、R.solani、F.verticilliodesin的菌丝的生长有显著的影响,抑制率分别为67.63%、78.87%、71.31%、74.65%;对扣培养法测定了菌株CEF-818的挥发性代谢产物对V.dahliae菌丝的生长有较显著的影响,抑制率为58.09%,对F.oxysporum、R.solani和F.verticilliodesin的抑制效果不显著;圆盘滤膜培养法测定了菌株CEF-818非挥发性代谢产物对V.dahliae、F.oxysporum、R.solani、F.verticilliodesin的菌丝的生长有极显著的影响,抑制率均为100%。(2)温室试验结果表明,灌根接种法和基质接种法处理过的棉花,其黄萎病的病情指数均有显著的降低,对棉花黄萎病的温室防治效果最高达到69.77%;利用灌根接种法和浸种接种法,检测CEF-818对棉花枯萎病的温室防治效果,结果表明,其防治效果为33.75%和13.44%;利用基质接种法和浸种接种法检测CEF-818对棉花立枯病温室的防治效果,结果表明,其防治效果为分别为54.82%和25.29%。(3)利用基质接种法和浸种接种法检测CEF-818对棉花黄萎病的田间防治效果,结果表明,对棉花黄萎病的田间防治效最高达63.73%。(4)菌株CEF-818可诱导棉花叶片中活性氧的爆发和胼胝质的沉积,RT-PCR法检测棉花叶片中防御相关基因的表达,结果表明,菌株CEF-818诱导棉花叶片中过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和病程相关基因PR10的上调表达。(5)q-PCR法检测棉苗根中V.dahliae的定值量,结果表明,对照组中V.dahliae的定殖量是处理组中的3.61倍,表明,菌株CEF-818能够抑制大丽轮枝菌对棉苗的入侵。(6)简青霉CEF-818固体发酵最适培养物为麦麸,其他添加物为葡萄糖、尿素和氯化钾,添加量按麦麸的质量比分别为2.5%、0.6%和0.6%,料水比为1:0.5,固体发酵最佳的培养条件为液体接种量为5%、初始p H为7、物料厚度为2 cm、培养温度为28℃、培养时间为7 d。在此条件下,简青霉CEF-818的产孢量为8.28×10~9 CFU/g。综上所述,本研究明确了菌株CEF-818对棉花黄、枯萎病、立枯病、红腐病的防治效果,为评估生防菌CEF-818的生防潜力及其应用范围提供参考依据,并为其菌剂的规模化生产提供了技术支持,为防治棉花病害提供帮助。
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