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根作为植物器官,一方面支撑了植物体的整个地上部分,另一方面根可以汲取土壤中的水分与养料运输到地上部分供植物体的生长发育。最近三十年来,以模式植物拟南芥为研究对象,应用植物遗传学、细胞生物学、生物化学与分子生物学、生物信息学等学科方法及显微技术,人们解析了主根、侧根发生的细胞谱系及分子机制。但是,有关不定根的研究却有待发掘。因此,本论文利用模式植物拟南芥叶片外植体再生不定根的体系,对植物激素内源合成控制不定根发生进行了系统研究。 植物体内生长素吲哚乙酸indoleacetic acid(IAA)合成的主要途径是通过两步化学反应完成的。首先,色氨酸Tryptophane(Trp)通过氨基转移酶TAA/SAC家族的催化,转变成吲哚丙酸Indole propionic acid(IPA);接着,IPA由YUCCA(YUC)基因所编码的黄素单氧化酶继续氧化催化变成IAA。研究发现,tryptophan aminotransferase of arabidopsis1(taa1)突变体再生不定根频率严重降低,外源施加生长素内源合成抑制剂Kynurenine(kyn)也会减弱生长素响应信号并导致再生频率降低。因此,生长素的内源合成贡献了不定根再生,为细胞命运转变做准备。 植物体内的细胞分裂素是一类腺嘌呤的衍生物,它的合成主要分为三步,首先在异戊烯基转移酶ISOPENTENYLTRANSFERASE(IPT)的催化下将二甲烯丙基二磷酸(DMAPP)的异戊烯基转移到三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)或磷酸腺苷(AMP)上,然后在细胞色素单氧酶(CYP735A)的催化下将异戊烯基羟基化,最后在核苷单磷酸磷酸水解酶LONELY GUY(LOG)的催化下生成细胞分裂素。细胞分裂素与内质网膜上的受体AHK结合使自身发生磷酸化,磷酸转移蛋白将磷酸基团转移到细胞核内的下游转录因子ARABIDOPSISRESPONSE REGULATOR(ARR)上,从而激活下游基因的表达。在再生不定根的过程中细胞分裂素的响应由强减弱再变强,并在根分生组织建立的过程中达到最强。外源施加细胞分裂素合成抑制剂洛伐他汀Lovastatin(Lov)可以使再生不定根变慢。与野生型相比,细胞分裂素突变体再生不定根变慢。在突变体背景下静止中心特异表达基因WUSCHEL RELATED HOMEOBOX5(WOX5)表达变广,并且根尖分生组织的正常结构被打乱。因此,细胞分裂素的内源合成主要参与了再生不定根过程中根尖分生组织建成这一过程。 综上,本论文选取了拟南芥离体叶片再生不定根这一研究体系,探讨了植物激素生长素和细胞分裂素的内源合成在不定根从头再生过程中的功能特异性。研究发现,生长素的内源合成贡献了不定根再生并为细胞命运转变做准备;而在细胞分裂素缺失的情况下,不定根发生的静止中心特化分生组织这一过程被打破,这一结果为进一步研究细胞分裂素是如何调控分生组织特化这一问题提供了基础。