HMGA(High Mobility GroupA)蛋白是一类位于染色体上的非组蛋白,所有的HMGA蛋白都含有九个高度保守的氨基酸序列和一个带负电荷的酸性C端。前者称为AT-钩,与富含AT的DNA小沟相结合。目前,对于HMGA的研究很多,但是有关HMGA在家蚕中研究仅限于在卵泡成熟中的作用。　　 我们从NCBI基因库中搜索到命名为HMGA的家蚕基因,通过BLAST比对,确认为家蚕基因,分析其编码的蛋白质序列,发现具备HMGA保守的序列,故命名为BmHMGA(Bombyx mori HMGA),GenBankNo.DQ402512。BmHMGA基因只含有一个外显子,cDNA全长1205bp,ORF大小为345bp,编码114个氨基酸残基。预测分子量为12.24kD,等电点为9.58。　　 我们根据ORF序列特征设计上下游引物,以本实验保存的家蚕蛹cDNA为模板,PCR扩增出与理论值相符的目的片段,插入融合表达载体pET-28a(+),成功构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21star(DE3)感受态细胞,经PCR、酶切鉴定以及测序分析证实重组正确。以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导,裂解菌体进行SDS-PAGE分析,在22kD附近有特异性蛋白条带,后经质谱检测,确定为融合蛋白。通过Ni-NTA柱亲和层析成功得到纯化的融合蛋白,用该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价在1:12800以上。提取家蚕各时期及组织的RNA,设计特异引物利用RT-PCR检测BmHMGA在转录水平上差异。　　 结果：表明:在各时期中,基因BmHMGA在卵的转录水平最高。家蚕五龄幼虫中,BmHMGA基因在头中的转录水平明显高于其他的组织;提取家蚕四个时期及五龄幼虫的头、卵巢、丝腺等组织的总蛋白,进行免疫印迹实验,结果显示,在五龄幼虫的头中BmHGMA基因表达量明显高于其他组织,在中肠,马氏管中没有检测到明显的信号,和RT-PCR的实验结果相一致。BmHMGA蛋白在家蚕四个时期均检测到表达信号,但差异很大,卵中信号最明显,蛾中最弱。ELISA半定量分析结果与RT-PCR和Western blotting结果相同。以家蚕BmN细胞进行免疫细胞化学实验,结果显示,BmHMGA蛋白仅在细胞质当中有分布。这些结果为深入研究家蚕BmHMGA基因的功能奠定了基础。