银纳米粒子的局域表面等离子体共振散射在生化药物分析中的应用研究

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纳米技术已经在各个领域中发挥着独特的优势和潜力。将纳米技术与光散射技术相结合,开创光散射分析的新天地,是近年来光散射分析化学的发展方向和趋势。本文以银纳米粒子为研究对象,探讨了不同大小、形态的银纳米粒子的局域表面等离子体共振散射和吸收性质,并将银纳米粒子作为光散射探针用于生化和药物分析,建立了一系列分析方法。研究论文的主要内容概括如下:1.合成了柠檬酸根包被的小粒径银纳米粒子,基于银纳米粒子在溶液中独特的局域表面等离子体共振吸收和散射特性,建立了一种简单、方便、快捷的半定量和定量检测盐酸黄连素的分析方法。银纳米粒子因表面包被有柠檬酸根,而处于静电排斥作用下,能均匀、稳定分散在溶液中,其独特的局域表面等离子体共振吸收性质使银胶溶液显黄色。在一定的pH环境中,当加入带正电的盐酸黄连素之后,由于破坏了银纳米之间的静电排斥作用,银粒子发生聚集,影响了银纳米粒子的局域表面等离子体共振,导致银胶的颜色发生从黄色到蓝色的变化。本文通过紫外可见吸收、光散射光谱等方法,研究了盐酸黄连素诱导下银纳米粒子的聚集过程,并且在优化的实验条件下,实现了浓度范围在0.05~0.4μM之间的盐酸黄连素的色度法检测以及紫外可见吸收定量检测。其中,根据银胶颜色变化而建立的色度检测方法是一种简单、不需要大型仪器、经济、快速的分析方法。2.合成了具有强烈的光散射性质的大粒径银纳米粒子。利用银纳米粒子在不同蛋白质上吸附性质不同,建立了一种通过普通LED电筒和载玻片就可以进行可视化的、免标记的免疫分析方法。探讨了银纳米粒子在抗原、抗体固载的玻片上吸附的机理,并优化了银纳米粒子在玻片上的吸附条件,实现了银纳米粒子在抗体结合后的玻片上的选择性吸附。通过普通的荧光分光光度计测定光散射信号,实现了在10~160ng/ml浓度范围抗体的定量检测,检测下限达到5.6ng/ml。此外,在普通的白光LED电筒的照射下,吸附在玻片表面的银纳米粒子,由于具有强烈的局域表面等离子体共振散射性质,可以被肉眼观察到。因此,实现了使用银纳米粒子作为散射可视化探针的固相表面免疫分析法。3.基于大粒径的银纳米粒子强烈的局域表面等离子体共振散射性质,我们提出了一种以玻片为固载相、银纳米粒子作为光散射探针、使用荧光分光光度计检测光散射信号的三明治免疫分析方法。该方法可以与高灵敏度的化学发光法媲美,且分析结果与临床检验结果相符合。此外,通过暗场光学显微镜,可以清楚的看到单个银纳米粒子的多色光散射现象,并结合显微光谱技术对单个银纳米粒子的光散射光谱进行了表征,这预示着银纳米粒子强烈的光散射特性可能成为一种新兴的光散射探针而应用于生化分析和标记中,为建立多色银纳米粒子标记的多通道分析方法打下了基础。4.通过碘对银纳米粒子的腐蚀,研究了银纳米粒子的组成和形态发生变化后的光散射特性。研究表明,碘离子可以在银纳米粒子表面吸附,导致银纳米粒子局域表面等离子体共振散射和吸收降低;当溶液中加入氯化铜,使碘离子氧化成碘单质后,碘能与银纳米粒子发生明显的化学反应,导致银纳米粒子的局域表面等离子体共振散射和吸收峰完全消失,并生成新的散射峰。进一步通过扫描电子显微成像和暗场显微成像研究表明,银纳米粒子被碘腐蚀后生成了更大粒径的颗粒,并且具有与银纳米粒子明显不同的光散射特性。基于以上原理,建立了在普通荧光分光光度计的定量检测碘的光散射分析方法和可视化的检测手段。这说明碘与银纳米粒子作用后,所产生的强烈的光散射信号,将在生化分析和检测中有潜在的应用前景。上述研究内容,探讨了不同大小、形状的银纳米粒子的局域表面等离子体共振散射及吸收性质以及药物、生物大分子与银纳米粒子之间的相互作用,建立了一系列基于银纳米粒子的光散射特性可视化分析方法。这将为银纳米粒子在光散射分析中的应用找到新途径。
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