miR-455-5p对结直肠癌细胞生物学特性的影响及机制

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目的:  1.研究miR-455-5p在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达及转染三株结直肠癌细胞后miR-455-5p表达水平的变化  2.探讨miR-455-5p对结直肠癌细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移等生物学功能的影响。  3.探讨miR-455-5p参与结直肠癌发生发展的机制,为结直肠癌的早期诊断、治疗提供潜在的生物学标志。  方法:  1.采用实时定量PCR检测在40对CRC组织及其对应癌旁组织中的miR-455-5p表达水平,同时检测三株结直肠癌细胞株(HCT-116、HT-29、SW-480)的表达情况;  2.将携带有miR-455-5p-模拟物(mimics)和miR-455-5p-抑制物(inhibitor)的脂质体复合物转染至三株CRC细胞后,分别采用BrdU法、流式细胞实验、划痕实验检测细胞增殖、凋亡及迁移能力;  3.通过靶基因预测软件来预测结直肠癌中miR-455-5p潜在的靶基因。采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western blotting)和荧光素酶实验进一步验证miR-455-5p对靶基因PIK3R1的作用。  结果:  1.miR-455-5p在CRC组织中的表达量为(0.56±0.29),明显低于其在癌旁组织中的表达量(2.48±1.57)(P<0.001)。临床病理因素分析结果显示,CRC组织中miR-455-5p的表达量与肿瘤分化有关(P<0.05);  2.miR-455-5p在三株结直肠癌细胞中表达良好,在miR-455-5p-mimics组中miR-455-5p表达量均上调,在miR-455-5p-inhibitors组中miR-455-5p表达量均下调;  3.与对照组相比,miR-455-5p-mimics组细胞的增殖活性均明显降低,而miR-455-5p-inhibitor组细胞的增殖活性均明显升高(P值均<0.05);  miR-455-5p-mimics组细胞的凋亡率明显升高,而miR-455-5p-inhibitor组细胞凋亡率明显降低(P值均<0.05);在HT-29细胞中,过表达miR-455-5p可抑制细胞的迁移,而miR-455-5p-inhibitor组细胞的迁移能力明显增强(P值均<0.05);  4.通过生物信息学分析预测PIK3R1(p85α调节亚基基因PI3K)是miR-455-5p在结直肠癌中的一个潜在靶基因。过表达miR-455-5p能够降低PIK3R1mRNA及蛋白的表达水平,抑制miR-455-5p表达则会上调PIK3R1mRNA及蛋白的表达水平(P值均<0.05),荧光素酶实验显示miR-455-5p能与PIK3R1基因的3’UTR结合。  结论:  1.miR-455-5p在CRC组织中低表达。  2.miR-455-5p在结直肠癌中可能起着抑癌基因的作用。  3.PIK3R1是miR-455-5p的一个潜在靶基因。
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