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大肠埃希氏菌,又名大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）,属于革兰氏阴性菌,主要分为致病性和非致病性两类。随着抗生素在畜牧业的普遍应用和滥用,导致多重耐药甚至泛耐药大肠杆菌的产生和流行,致使大肠杆菌病的防控愈发困难。因此,通过开展大肠杆菌的耐药性调查,分析其与基因型、致病性和分子流行病学之间的关系,才能够选择更加合适有效的药物对大肠杆菌病进行预防与治疗。细菌耐药性的产生与多种蛋白相关,整合子作为一种重要的耐药基因捕获及传播元件,已经成为产生细菌耐药的主要机制之一,研究发现一些蛋白,如recA等可以通过应激反应影响Ⅰ类整合酶基因的表达,但外膜蛋白F（ompF）作为抗生素进入细菌内部的主要通道,它对大肠杆菌耐药基因的转移是否也有影响,目前尚无报道。本研究从甘肃、青海两省的病料和粪便样品中分离到猪源,牦牛源,鸡源和犬源大肠杆菌各100株。MLST分型发现这400株大肠杆菌共有142个ST型（1STs/2.8株大肠杆菌）,揭示该地区大肠杆菌流行菌株的复杂性。虽然不同动物源大肠杆菌的ST型不同,但均存在ST10（优势ST型）。eBURST分析将142个ST型分为19个克隆群（CCs）和67个单体,其中CC1,CC3,CC7,CC14和CC16克隆群属于潜在的致病群（B2/D群）,其它属于非致病群（A/B1群）。B2/D群大肠杆菌在健康动物中的携带率为12.5%。耐药性检测发现,400株大肠杆菌共存在237个耐药表型,不同动物源大肠杆菌的耐药谱虽然不同,但所有动物源大肠杆菌对氨苄西林,四环素和强力霉素的耐药率均高于其它药物,对美罗培南和多粘菌素的耐药率均低于其它药物;伴侣动物（狗）和家畜（鸡和猪）对大多数抗生素的耐药率均在40%以上,而牦牛对15种抗生素的耐药率均低于40%;此外,伴侣动物（狗）和家畜（鸡和猪）的ESBL大肠杆菌分离株也远远多于牦牛,提示我们对伴侣动物和家畜要合理用药。本研究通过耐药性检测,筛选出一株对本试验所选用的15种抗生素均敏感、且Ⅰ类整合酶基因阳性并能形成生物被膜的大肠杆菌N46（E.coli N46）进行基因敲除,研究其耐药性机理。通过Red同源重组,敲除E.coli N46的ompF基因,命名为E.coli N46/OmpFΔ;通过psTV28质粒成功构建回复株,命名为E.coli N46/OmpFcom。生长曲线检测发现ompF基因虽然不是大肠杆菌生长繁殖所必需的功能性基因,敲除后不会导致大肠杆菌的死亡,但会对大肠杆菌的生长有一定的影响。实时荧光定量PCR检测野生株,ompF基因缺失株和回复株的Ⅰ类整合酶基因在生物被膜状态下的表达情况,发现ompF基因缺失株Ⅰ类整合酶基因的表达水平比野生株明显降低,回复株Ⅰ类整合酶基因的表达水平有所升高,但不能回复到野生株的表达水平。初步确定在生物被膜状态下,ompF基因对大肠杆菌Ⅰ类整合酶基因的表达有影响。